嗅鞘細胞（OECs）的分離培養(yǎng)及其應用初探.pdf

1、脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)是臨床上常見病多發(fā)病，嚴重的脊髓損傷多發(fā)生在青壯年，并且在我國有逐年增加的趨勢。脊髓損傷的治療沒有有效的方法。目前治療的策略主要局限于預防和減少繼發(fā)損傷及有助于神經(jīng)恢復或再生的干預調(diào)節(jié)。實驗表明胚胎脊髓移植、細胞(干細胞)移植、轉基因細胞移植、基因治療等使脊髓功能得到了部分恢復，為脊髓損傷的治療提供了新的治療方法。尤其是嗅鞘細胞(Ofactory esheathing cell，O

2、ECs)移植修復脊髓損傷在實驗和臨床應用中獲得了初步成功，成為有望解決脊髓損傷這一臨床世紀難題的重要方法之一。 本實驗主要探討了小鼠OECs的分離培養(yǎng)、純化增殖和鑒定方法，并初步研究了OECs對神經(jīng)細胞生長的作用，目的是摸索出一套快速、穩(wěn)定、高效的OECs的培養(yǎng)方法，為研究OECs在治療SCI作用提供細胞來源和理論基礎。 實驗分別采用4種不同的分離方法進行OECs的分離，獲得的細胞懸液在同一條件下進行培養(yǎng)，在第12天時對

3、細胞的數(shù)量和形態(tài)進行比較和觀察。分別采用3種不同的純化方法對OECs進行純化，在第12天時對細胞的純度進行比較。將培養(yǎng)的OECs和背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)消化制成細胞懸液，以相同比例接種，接種密度為10<'4>/ml，10天后將聯(lián)合培養(yǎng)的細胞置于倒置顯微鏡下進行形態(tài)學觀察。 實驗結果顯示，采用機械破碎后胰酶消化再經(jīng)紗網(wǎng)過濾的分離方法分離OECs的效果明顯比其它方法好，分離得到OECs數(shù)量最多

4、，并且對細胞的形態(tài)沒有影響；分離培養(yǎng)的OECs成雙極或梭形、多突起形和扁圓形油煎蛋形，形態(tài)學特征明顯：差速貼壁和Ara-c抑制相結合的純化培養(yǎng)方法兼收了兩者的優(yōu)點，實驗證實是一種簡單經(jīng)濟而又有實效的OECs培養(yǎng)方法；OECs對被根神經(jīng)節(jié)細胞生長具有促進作用，揭示OECs對SCI的恢復有促進作用，但是還要有進一步的實驗來證明。 本實驗摸索出了一套成熟OECs的分離培養(yǎng)純化方法，為研究OECs生物學特征以及應用提供了穩(wěn)定的細胞來源，