pH和游離血紅蛋白對(duì)體外培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞存活的影響.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)著重就兩個(gè)因素在體外環(huán)境下對(duì)嗅鞘細(xì)胞存活的影響進(jìn)行了研究。一是觀察不同pH條件對(duì)嗅鞘細(xì)胞存活的影響；二是不同濃度游離血紅蛋白對(duì)嗅鞘細(xì)胞存活的影響。 實(shí)驗(yàn)一：分離培養(yǎng)2.5月齡大鼠嗅球嗅神經(jīng)層及嗅顆粒層的嗅鞘細(xì)胞，培養(yǎng)8天，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛時(shí)進(jìn)行嗅鞘細(xì)胞純度檢測(cè)，同時(shí)將細(xì)胞分為4組，分別在pH為6.8，7.0，7.4，7.8條件下繼續(xù)培養(yǎng)，用相差顯微鏡觀察嗅鞘細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，培養(yǎng)第三天時(shí)進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞活性并進(jìn)行PI/

2、Hoechst染色計(jì)算各組細(xì)胞死亡率。 結(jié)果顯示：在不同pH條件下各組細(xì)胞生長(zhǎng)狀況差異明顯，7.0組和6.8組細(xì)胞培養(yǎng)1天后嗅鞘細(xì)胞突起回縮，萎縮成團(tuán)，細(xì)胞生長(zhǎng)增殖停滯。第2天可見(jiàn)有較多死亡的細(xì)胞，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，死亡細(xì)胞數(shù)量增加。7.8組培養(yǎng)1天觀察細(xì)胞即有較多死亡，第2天可見(jiàn)細(xì)胞大面積死亡。而7.4組細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，繼續(xù)培養(yǎng)3天未見(jiàn)明顯形態(tài)學(xué)變化。MTT實(shí)驗(yàn)顯示7.4組OD值明顯高于其他3組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，7.8組OD值和其他

3、3組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而7.0組和6.8組之間比較無(wú)顯著性差異。PI/Hoechst染色顯示7.8組PI染色陽(yáng)性細(xì)胞比例最高，7.0，6.8次之，7.4組無(wú)。 實(shí)驗(yàn)證明：(1)遠(yuǎn)離生理?xiàng)l件的pH環(huán)境不利于嗅鞘細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖，可以造成嗅鞘細(xì)胞不同程度的死亡；(2)堿性環(huán)境對(duì)嗅鞘細(xì)胞的損害作用大于酸性環(huán)境。 實(shí)驗(yàn)二：觀察了不同濃度游離血紅蛋白條件對(duì)嗅鞘細(xì)胞存活的影響。嗅鞘細(xì)胞原代培養(yǎng)第8天用S-100/Hoechst染色檢測(cè)培

4、養(yǎng)細(xì)胞的嗅鞘細(xì)胞純度。隨機(jī)將培養(yǎng)細(xì)胞分為5組，分別于不同濃度游離血紅蛋白(1，10，50，100μmmol/L和對(duì)照組)繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，觀察了嗅鞘細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化，檢測(cè)各組的細(xì)胞活力并采用了PI/Hoechst雙熒光染色計(jì)算死亡細(xì)胞比例。 結(jié)果顯示：不同濃度游離血紅蛋白組嗅鞘細(xì)胞不同程度出現(xiàn)死亡細(xì)胞，殘存細(xì)胞生長(zhǎng)狀況差，對(duì)照組細(xì)胞未見(jiàn)明顯形態(tài)變化。各游離血紅蛋白組細(xì)胞活力隨游離血紅蛋白濃度升高而降低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PI染色陽(yáng)

5、性細(xì)胞比例隨游離血紅蛋白濃度的增加而升高。 實(shí)驗(yàn)證明：游離血紅蛋白可以造成體外培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞的死亡，且死亡率和游離血紅蛋白濃度呈正相關(guān)。 綜上所述，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明在體外條件下病理生理范圍內(nèi)的pH變化和的游離血紅蛋白不利于的嗅鞘細(xì)胞的存活。提示在SCI后的pH變化和游離血紅蛋白的釋放不利于移植嗅鞘細(xì)胞的存活。因此如何減輕或防止pH改變和游離血紅蛋白對(duì)移植嗅鞘細(xì)胞的不利影響，使嗅鞘細(xì)胞能夠最大限度的發(fā)揮作用，是在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或臨