HPV58型病毒E1蛋白B細(xì)胞線性表位研究.pdf

1、宮頸癌是婦科腫瘤中僅次于乳腺癌的第二大殺手。1995年，國際癌癥研究協(xié)會(huì)(IARC)認(rèn)定人類乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）16型和18型具有高致癌性。進(jìn)一步的研究表明，HPV持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的必要起因，而且除了16型和18型，31、33、35、45、51、52、58和59型均具有高度致癌危險(xiǎn)性。HPV不同型別的檢出率存在地域差異，其中，我國尤其是東南部地區(qū)是HPV58型的高發(fā)地區(qū)之一，在某些地區(qū)的檢出

2、率甚至高于18型，僅次于16型。
　　人乳頭瘤病毒是一種雙鏈環(huán)狀DNA病毒，目前已鑒定出的亞型約有200種。它由6個(gè)早期蛋白(E1、E2、E4、E5、E6、E7)和兩個(gè)晚期蛋白(L1、L2)構(gòu)成，其中E1蛋白在整個(gè)HPV家族中是保守性最強(qiáng)的蛋白之一。E1蛋白是病毒DNA復(fù)制的啟動(dòng)蛋白，并能與E2蛋白共同作用影響宿主細(xì)胞生長周期。鑒于HPV58型在我國的高發(fā)病率以及人乳頭瘤病毒E1蛋白的高保守性和重要功能，鑒定HPV58型E1蛋白的

3、線性B細(xì)胞抗原表位對(duì)于研制相關(guān)疫苗和抗體藥物并最終為宮頸癌的診斷與治療提供新的方案具有重要作用。
　　我們利用pET-28b原核表達(dá)載體實(shí)現(xiàn)了HPV58型E1蛋白N端和C端的表達(dá)、純化，以N端和C端重組蛋白為抗原分別免疫三只雄性新西蘭大白兔，獲得抗血清。隨后，我們采用了改良的生物合成肽法，使用pXXGST-1短肽表達(dá)載體合成了70條覆蓋E1蛋白N端和C端的相互重疊9個(gè)氨基酸殘基的18肽，利用制備的抗E1-N及E1-C抗血清進(jìn)行免疫

4、印跡鑒定。我們鑒定出HPV58型E1蛋白全部24個(gè)主要B細(xì)胞線性表位，包括5個(gè)優(yōu)勢表位(DETADDSGTDLIEFIDDSVQSTTQAEA, CTHRKRKIIELEDSGYGN, MSNISDVQGTTPEWIDRL, TVLQHSFNDDIFDLSEMI,EFNNPFPFDANGNPVYKI)。
　　本研究為后續(xù)HPV58型E1蛋白精細(xì)線性B細(xì)胞抗原表位作圖奠定了基礎(chǔ)，對(duì)于研制相關(guān)疫苗和抗體藥物并最終為宮頸癌的診斷與治療提