肝癌靶向性N-ras反義表達載體的構建及對人肝癌細胞系BEL-7402作用的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩82頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、山東大學碩士學位論文肝癌靶向性Nras反義表達載體的構建及對人肝癌細胞系BEL7402作用的研究姓名：孔建平申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：孫汶生2001.5.20山東大學碩士論文酶切鑒定插入方向，并進行DNA測序和同源性分析。以陽離子脂質體介導法將重組反義核酸表達載體轉染受體細胞BEL一7402，并經潮霉素B(100“g／m1)篩選，對抗性克隆擴增培養(yǎng)，從而建立了Nras表達阻斷的穩(wěn)定的HygB抗性肝癌細胞株。通過流式細胞儀分

2、析，測定反義核酸對肝癌細胞靶基因表達、細胞周期的分布及細胞凋亡的影響。結果：將106kb的NraseDNA片段和去磷酸化修飾的載體pEBAF進行連接轉化，隨機小量擴增抽提質粒，經BamHI酶切，電泳證實目的基因成功插入。以隨機引物法制備的地高辛標記N—raseDNA探針，其靈敏度測定為lpg。菌落原位雜交結果亦證實連接成功。載體pEBAF在NraseDNA插入位點下游125bp處有一PvuII切點，而Nras57端275bp處亦有同一酶

3、切位點。對初篩陽性克隆用PvuII酶切鑒定，電泳如見到900bp和156kb為正向插入，如見到400bp和16Ikb為反向插入。兩者分別命名為pEBhF／sNras和pEBAF／as—Nras。將p朗AF／as—N—ras進行測序和同源性分析，結果顯示該序列包括NraseDNA蛋白全部編碼區(qū)及其兩側部分具有轉錄和表達調控功能的非編碼序列，其中57端為61bp，37端為378bp。轉染反義表達載體pEBAF／as—N—ras的肝癌細胞N一

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論