PI3K通路介導(dǎo)apelin促H9c2大鼠心肌細(xì)胞肥大.pdf

1、目的：
　　APJ受體是孤兒G蛋白偶聯(lián)受體，apelin是其內(nèi)源性配體，本實驗室已報道，在雙腎雙夾易卒中型腎血管性高血壓大鼠模型中apelin表達(dá)異常增加并伴隨心肌肥厚以及在左室肥厚SD大鼠模型中APJ表達(dá)也增加，這提示apelin可能誘導(dǎo)心肌肥厚形成，本課題研究APJ內(nèi)源性配體apelin誘導(dǎo)H9c2大鼠心肌細(xì)胞肥大及其PI3K信號通路。
　　方法：
　　1.熒光倒置顯微鏡觀察H9c2大鼠心肌細(xì)胞形態(tài)；
　　2

2、.相差顯微鏡測量H9c2大鼠心肌細(xì)胞直徑，Multisizer3庫爾特細(xì)胞特性分析儀測量H9c2大鼠心肌細(xì)胞體積，BCA法測定H9c2大鼠心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量；
　　3. Western blot檢測信號分子PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2、p70S6K、p-p70S6K和caveolin-1表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.相差顯微鏡、Multisizer3和BCA法測定結(jié)果顯示，與

3、Control組比較，2μM apelin-13單獨(dú)處理96h后，H9c2大鼠心肌細(xì)胞直徑明顯增加（P<0.05），體積明顯增大（P<0.01），蛋白質(zhì)含量也明顯增加（P<0.01）；PI3K特異性抑制劑LY294002（25μM），Akt特異性抑制劑1701-1（10μM），ERK1/2特異性抑制劑PD98059（10μM）均能抑制 apelin-13引起的H9c2大鼠心肌細(xì)胞直徑、體積和細(xì)胞蛋白質(zhì)含量增加。
　　2. West

4、ern Blot檢測結(jié)果顯示，與Control組比較，2μM apelin-13單獨(dú)處理4h后，H9c2大鼠心肌細(xì)胞中PI3K表達(dá)上調(diào)，PI3K磷酸化、Akt磷酸化、ERK1/2磷酸化、p70S6K磷酸化增強(qiáng)，caveolin-1表達(dá)下調(diào)，Akt、p70S6K和ERK1/2表達(dá)無明顯影響；PI3K特異性抑制劑LY294002（25μM）預(yù)孵育1h后，抑制apelin-13引起的PI3K磷酸化、Akt磷酸化、ERK1/2磷酸化、p70S6

5、K磷酸化增強(qiáng)；Akt特異性抑制劑1701-1（10μM）預(yù)孵育1h后，抑制apelin-13引起的Akt磷酸化、ERK1/2磷酸化、p70S6K磷酸化增強(qiáng)，對apelin-13引起的PI3K磷酸化增強(qiáng)無明顯影響；ERK1/2特異性抑制劑PD98059（10μM）預(yù)孵育1h后，抑制apelin-13引起的ERK1/2磷酸化、p70S6K磷酸化增強(qiáng)，對apelin-13引起的PI3K磷酸化和Akt磷酸化增強(qiáng)無明顯影響；與apelin-13組