大黃魚與黃姑魚細(xì)胞遺傳學(xué)初步研究.pdf

1、本研究優(yōu)化了魚類頭腎細(xì)胞染色體制備方法，并應(yīng)用多種染色體熒光顯帶技術(shù)和熒光原位雜交技術(shù)，對(duì)大黃魚(Larimichthys crocea)與黃姑魚(Nibea albiflora)染色體進(jìn)行了分析，對(duì)其核型、帶型特征進(jìn)行描述和比較。結(jié)果如下：
　　1、按每克魚體重于胸鰭基部注射8 mg黨參的煎汁液/20μg BSA混合液，三針法注射，暫養(yǎng)在25℃水中，按0.5μg/g（魚體重）的濃度注射秋水仙素，低滲40min，滴片前將固定液換成

2、甲醇/乙酸=2:1的卡諾氏固定液和空氣干燥法滴片能讓染色體伸展得更長。
　　2、大黃魚染色體熒光帶型分析結(jié)果顯示：PI著色均勻；DPI染色在NOR區(qū)域呈現(xiàn)強(qiáng)熒光，分布于10號(hào)染色體（sm/m)的短臂端；DAPI染色呈現(xiàn)明暗交替的帶型；DDAPI染色，近著絲粒區(qū)域呈現(xiàn)強(qiáng)熒光，其他部分熒光不均勻，但未見重復(fù)性好的帶紋。雌雄個(gè)體中期染色體比較結(jié)果初步顯示，雄性個(gè)體2條10號(hào)染色體異形。
　　黃姑魚染色體熒光帶型分析結(jié)果顯示：PI著

3、色均勻；DPI染色在 NOR區(qū)域呈現(xiàn)強(qiáng)熒光，分布于1號(hào)染色體長臂，距著絲粒1/3臂處；DAPI染色在NOR所在位置呈現(xiàn)陰性帶，其余部分著色較均勻；DDAPI染色在各條染色體著絲粒部位及1號(hào)染色體的長臂部位NOR區(qū)域呈強(qiáng)陽信號(hào)。
　　3、大黃魚染色體熒光原位雜交（FISH）結(jié)果顯示：18S rDNA定位10號(hào)染色體（sm/m)的短臂端；端粒序列（TTAGGG） n定位于染色體的端部，在一對(duì)染色體上觀察到臂間著絲粒；H-P3K克隆定位

4、于全部染色體的著絲粒及短臂區(qū)域；大黃魚總DNA為探針作GISH，在著絲粒區(qū)域及部分端粒呈強(qiáng)陽性信號(hào)；黃姑魚總DNA為探針作GISH，在著絲粒和端粒區(qū)域呈現(xiàn)強(qiáng)陽信號(hào)。
　　黃姑魚染色體FISH結(jié)果顯示：18S rDNA定位1號(hào)染色體長臂間，距著絲粒1/3臂長處，具一強(qiáng)一弱的特點(diǎn)；端粒序列（TTAGGG）n定位于染色體的端部；H-P3K克隆定位于1號(hào)染色體的著絲粒區(qū)域；大黃魚總DNA為探針作GISH，在著絲粒和段端粒區(qū)域呈強(qiáng)陽性信號(hào)，

5、其中1號(hào)染色體著絲粒區(qū)域呈現(xiàn)超強(qiáng)陽性信號(hào)；黃姑魚總DNA為探針作GISH，在著絲粒區(qū)域和部分染色體臂間呈現(xiàn)強(qiáng)陽信號(hào)，1號(hào)染色體著絲粒區(qū)域呈現(xiàn)超強(qiáng)陽性信號(hào)， NOR位置呈現(xiàn)亞強(qiáng)陽性信號(hào)。
　　4、利用IPP6.0顯示了大黃魚DAPI熒光強(qiáng)度二維分布與中軸強(qiáng)度譜，以及黃姑魚GISH熒光強(qiáng)度二維分布與中軸強(qiáng)度譜，基于這些資料排列了大黃魚和黃姑魚核型，測(cè)量了核型數(shù)據(jù)。其中，大黃魚核型公式為2n=2sm+4st+42t；黃姑魚的核型公式為2

6、n=48t。
　　本研究在大黃魚和黃姑魚兩物種中得到豐富的染色體形態(tài)標(biāo)志和參數(shù)。基于這些數(shù)據(jù)并結(jié)合圖像分析技術(shù)，首次實(shí)現(xiàn)大黃魚與黃姑魚染色體準(zhǔn)確識(shí)別與配對(duì)，為深入開展這兩種魚類分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究奠定了必要基礎(chǔ)。研究結(jié)果還揭示了大黃魚和黃姑魚染色體結(jié)構(gòu)部分特征，包括主要rDNA簇的分布、著絲粒序列、異染色質(zhì)分布、AT/GC富集的分布等；并顯示大黃魚和黃姑魚間在這幾個(gè)方面均存在較大的結(jié)構(gòu)差異，為分析兩物種雜交后代染色體組成奠定了基礎(chǔ)，