JD27白蛋白納米粒的制備及性能的初步研究.pdf

1、冬凌草提取物的衍生物JD27是一種具有發(fā)展前景的藥物前體，具有低毒、抗炎、抗腫瘤活性的小分子化合物。但是JD27水溶性較差，生物利用度低，限制了它的臨床開發(fā)使用，因此本文以生物相容性良好、安全無毒、無免疫原性、可降解的人血清白蛋白為載體，制備了JD27白蛋白納米粒，旨在提高其水溶性，延長藥物作用時間，提高抗腫瘤效果。
　　1、白蛋白納米粒的制備及細胞動力學研究
　　采用去溶劑-化學交聯(lián)法制備JD27白蛋白納米粒。以粒徑、包封

2、率和載藥量為指標，對納米粒制備的影響因素進行單因素考察分析，確定最佳制備條件，測定其平均粒徑為(313.6±10.22)nm，平均包封率為（83.5±1.02）％，平均載藥量為（7.59±0.09）％，優(yōu)化處方可行且重現(xiàn)性好。
　　考察JD27白蛋白納米粒特性并進行了表征，掃描電鏡圖顯示納米粒粒徑分布均勻，呈球形且表面光滑。透析法考察JD27溶液和JD27白蛋白納米粒的體外釋放結果表明:JD2720h累積釋放量約為95％，而JD2

3、7白蛋白納米粒40h累積釋放量約為85％，表明JD27白蛋白納米粒具有一定的緩釋特性。穩(wěn)定性考察實驗結果顯示:在4℃條件下凍干粉可以穩(wěn)定放置6個月，表明該制劑具有較好的穩(wěn)定性。
　　MTT法測定JD27和JD27白蛋白納米粒對EC-9706細胞抑制率，實驗結果表明:JD27白蛋白納米粒對細胞的抑制率在24h和48h均高于JD27組(P＜0.05)。Hoechst33258熒光染色法檢測不同濃度JD27在不同作用時間下對EC-970

4、6細胞膜通透性影響的結果顯示:JD27可以改變EC-9706細胞膜的通透性，使藥物更容易進入細胞，更好的發(fā)揮抗腫瘤效果。采用高效液相色譜法研究JD27、JD27白蛋白納米粒和JD27-β-環(huán)糊精包合物(JD27-β-CD)細胞內動力學，結果顯示JD27白蛋白納米粒、JD27和JD27-β-CD藥-時曲線下面積AUC分別是(574.88±12.38)(ng/106cells)·h、(366.85±11.95)(ng/106cells)·h

5、和(432.09±15.96)(ng/106cells)·h;平均滯留時間MRT分別為(9.85±0.79)h、(4.41±0.26)h和（6.26±1.30）h;消除半衰期t1/2(Kel)分別為(7.37±2.4)h、(3.60±0.23)h和(5.64±0.74)h。JD27白蛋白納米粒的AUC、MRT和t1/2(Kel)均顯著高于JD27和JD27-β-CD(P＜0.05)。JD27白蛋白納米?？商岣逧C-9706細胞對JD27

6、的攝取，增加JD27在細胞內的聚積，減慢消除速率，延長細胞內藥物滯留時間，改變藥物在細胞內的動力學特征。
　　2、Westernblot檢測JD27白蛋白納米粒對食管癌EC-9706細胞周期相關蛋白表達的影響
　　用濃度為0，8，16，32μg/ml的JD27白蛋白納米粒處理EC-9706細胞24h后，用Western blot法檢測Cdc-2，CyclinB1以及CyclinD1蛋白表達情況，實驗表明JD27白蛋白納米粒對

7、EC-9706細胞抑制作用可能是通過下調EC-9706細胞周期相關蛋白CyclinB1和Cdc-2的表達，上調CyclinD1周期蛋白的表達來實現(xiàn)的。
　　3、大鼠肝S9體外孵育法檢測JD27白蛋白納米粒對大鼠體內CYP1A2，CYP2D6，CYP2E1酶活性的影響
　　本研究以非那西丁，右美沙芬，氯唑沙宗為探針藥，HPLC法測定探針藥濃度，考察JD27白蛋白納米粒對CYP1A2，CYP2D6，CYP2E1酶體外代謝活性的影