家蠶微衛(wèi)星序列（SSR）在染色體上的定位分析.pdf

1、染色體是細胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)，是遺傳物質(zhì)的載體。染色體的結(jié)構(gòu)、形態(tài)、功能是細胞遺傳學中的核心內(nèi)容。染色體核型分析，是認識生物遺傳、變異和進化的重要方法，已成為研究生物遺傳多態(tài)性的重要工具之一。這種方法通過比較細胞染色體的形態(tài)參數(shù)，如相對長度、著絲粒指數(shù)、長短臂之比等將每條染色體按各自的特征區(qū)分開，得到一定的染色體組型。家蠶染色體存在一定的特殊性；數(shù)目多、中期形態(tài)差異甚微、無長短臂之比等可辨特征。早期，家蠶染色體識別和基岡定位研究主要利用

2、性腺減數(shù)分裂粗線期的染色體、早期胚胎和滯育卵有絲分裂早中期的染色體作為材料，按照相對長度和部分限性易位系統(tǒng)或缺失等來進行核型分析?，F(xiàn)代科技的發(fā)展與完善，使分子生物學技術(shù)已經(jīng)日益滲透到染色體研究中。熒光原位雜交技術(shù)(FISH)已成為連接細胞遺傳學與分子遺傳學的橋梁，使得我們可以在分子水平更加詳細地研究染色體。 本研究在前人的基礎(chǔ)上，通過對家蠶染色體核型模式的分析，近而利剛FISH技術(shù)，對家蠶微衛(wèi)星序列SSR在家蠶染色體進行了定位

3、?，F(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下： 1.家蠶染色體的核型模式 選取家蠶品種人造卵母細胞粗線期染色體，篩選了10個形態(tài)清晰、分散良好、背景干凈、染色體數(shù)目完整的細胞。用Image J對其絕對長度和相對長度進行了測算。并對最好的一個細胞進行了核型排列。結(jié)果表明：不同細胞的染色體總長度差異較大，10個細胞染色體平均總長為311.903μm，最長為388.869μm，最短為267.884μm,兩者相差120.985μm；其次，同一細胞內(nèi)各

4、染色體絕對長度也互不相同，最長染色體的長度與最短染色體的比值最大為3.881，平均為3.007，而且不同細胞相同序號染色體之間的長度差異也很大。如2號染色體最短的為12.924μm，最長的為19.928μm，相差達7.004μm。因此，絕對長度作為家蠶染色體核型分析的依據(jù)較小。但10個細胞相同序號染色體的相對長度比較接近，最高標準差為0.889，最低僅為0.095，相對絕對長度而言，差異更小。 另外，本文就染色體的絕對長度與相對

5、長度與前人所分析的數(shù)據(jù)進行了比較，28條染色體中絕對長度平均值相差最大為2.163um，最小為0.957um；而相對長度的差異就更小，最大為0.494％，最小僅有0.003％。并對28條染色體的相對長度的實驗數(shù)據(jù)與前人數(shù)據(jù)進行了方差分析，結(jié)果顯示：同一序號染色體測量值沒有顯著差異，這表明相對長度是一個比較穩(wěn)定的參數(shù)，它代表了某一條染色體在整個染色體群中所占的比例。能相對避免因不同時期染色體收縮程度不同而造成絕對長度的差異。由此說明在材料

6、相同的情況下，減數(shù)分裂粗線期染色體長度變化并無明顯差異，可以用作核型分析，粗線劃染色體的相對長度是一個比較穩(wěn)定的數(shù)據(jù)，適合作為建立模式的參數(shù)。最后，綜合以上的各種參數(shù)，建立了一個家蠶減數(shù)分裂染色體的核型模式圖，初步反映每條染色體各自的特征。用Image J染色體分析軟件來測量家蠶粗線期染色體相對長度和絕對長度與傳統(tǒng)的細銅絲測量相比，減少了步驟，降低了主觀誤差，大大提高了準確性和工作效率。 2.SSR的FISH研究 以D

7、IG標記SSR作為探針，對家蠶不同時期染色體細胞進行原位雜交，染色體用DAPI復(fù)染。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在雄蠶、雌蠶減數(shù)分裂間期、粗線期和中期，SSR(2301)和SSR(2310)都發(fā)現(xiàn)有雜交信號。但是相對于哺乳動物而言，信號檢出率偏低。其中，間期雜交率最高(平均為20.85％和18.84％)；粗線期次之，為10.26％和11.36％；中期最低，為5.66％和2.13％。另外將兩探針混合后雜交，僅在間期和粗線期發(fā)現(xiàn)信號，而且檢出率非常低，為5.

8、10％和3.17％。每個探針分別挑選10個信號位置相對一致的染色體群進行核型分析。發(fā)現(xiàn)SSR(2301)和SSR(2310)以及混合探針雜交信號均位于染色體核型模式圖中的第16號染色體。其中含有SSR(2301)探針信號的染色體相對長度是3.475％，含有SSR(2310)探針信號的染色體相對長度是3.350％，含有兩探針混合后的雜交信號的染色體相對長度是3.465％。這一結(jié)果與前面建立的卵母細胞減數(shù)分裂粗線期染色體核型模式圖的第16號