CEF感染REV后部分染色體微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的研究.pdf

1、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病(reticuloendotheliosis，RE)是繼雞馬立克氏病、雞淋巴細胞白血病之后的第三種病毒性腫瘤病。微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatelliteinstability,MSI)廣泛地應(yīng)用于人類腫瘤病的檢測。目前未見有應(yīng)用微衛(wèi)星技術(shù)研究禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒(reticuloendotheliosisvirus，REV)感染雞胚成纖維細胞后引起宿主基因組變化的報道。本試驗將REV感染雞胚成纖維細胞后，檢測

2、雞染色體上微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，旨在發(fā)現(xiàn)禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒感染雞胚成纖維細胞后是否引起宿主基因組的改變，為此病的早期診斷及腫瘤的分子發(fā)病機制提供線索。
　　本試驗中應(yīng)用22個SPF雞胚培養(yǎng)雞胚成纖維細胞，將每個雞胚的細胞分成兩部分，一半細胞接種REV，另一半作為對照，獲得含試驗和對照的22組樣本，提取細胞的基因組DNA。選取雞1、2、3號染色體上135個微衛(wèi)星標記，分別采用聚合酶鏈式反應(yīng)、12％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染等技術(shù)檢

3、測基因組微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。
　　試驗結(jié)果統(tǒng)計顯示135個微衛(wèi)星標記，有106個位點發(fā)生不同百分率的MSI，占全部微衛(wèi)星標記的78.52％。其中ABR0139變化率為50.00％。變化率在30％以上的位點共有16個。這16個位點中位于1號染色體上的位點有8個，分別是ABR0139、ABR0172、MCW0036、ABR0504、ABR0528、ABR1328、MCW0167、ABR0368;位于2號染色體上的位點有7個，分別是ABR0

4、404、ABR0197、ABR0599、ABR0107、ABR0004、ABR0067、ADL0300;位于3號染色體上的位點有1個，分別是ABR0350。另外有29個標記用12％聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法沒有檢測到變化。
　　22組雞胚成纖維細胞感染REV后全部表現(xiàn)出MSI。3號樣品，MSI發(fā)生率最高為40.00％，其次1號樣品MSI發(fā)生率為25.19％。其余樣品的MSI變化率均在在25％以下。其中，MSI變化率在20-25％的樣