雞胚成纖維細(xì)胞感染禽白血病病毒ALV-J后1號(hào)染色體微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究.pdf

1、腫瘤病的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MicrosatelliteInstability,MSI)的研究已經(jīng)有20年的歷史，但是除本實(shí)驗(yàn)室利用MSI對(duì)馬立克氏病做過(guò)早期診斷，國(guó)內(nèi)外對(duì)于雞腫瘤病的MSI的報(bào)道實(shí)屬罕見(jiàn)。應(yīng)用微衛(wèi)星技術(shù)研究禽白血病病毒(AvianLeukosisVirus，ALV)感染雞胚細(xì)胞引起宿主基因組變化還沒(méi)有人報(bào)道過(guò)。本試驗(yàn)將ALV-J強(qiáng)毒株感染雞胚成纖維細(xì)胞后，應(yīng)用雞1號(hào)染色體上53個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，旨在發(fā)現(xiàn)禽白血病病毒感染雞胚成纖

2、維細(xì)胞是否引起細(xì)胞基因組微衛(wèi)星的改變，研究病毒感染早期階段的基因組變化，為此病的早期診斷及腫瘤的分子發(fā)病機(jī)制提供線索。
　　 23個(gè)SPF雞胚的組織，每個(gè)雞胚組織的一半提取DNA。另外一半組織培養(yǎng)雞胚成纖維細(xì)胞并接種ALV-J培養(yǎng)7d，ELISA檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞上清液ALV-Jp27抗原為陽(yáng)性后，收集細(xì)胞并提取DNA。獲得含試驗(yàn)和對(duì)照的23組樣本，用雞1號(hào)染色體上53個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物采用12％變性聚丙烯酰胺

3、凝膠電泳，銀染后用凝膠成像系統(tǒng)記錄結(jié)果，觀察每個(gè)微衛(wèi)星條帶的變化。
　　 試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表顯示1號(hào)染色體的53個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，有32個(gè)位點(diǎn)發(fā)生不同百分率的MSI，占微衛(wèi)星標(biāo)記的60.37％。檢測(cè)到發(fā)生MSI的微衛(wèi)星位點(diǎn)，表現(xiàn)出不同的百分率，有2個(gè)位點(diǎn)MSI變化率較高，ABR0169和ABR0522變化率分別為52.17％和47.83％。高頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定性MSI-H（MSI變化率超過(guò)20％）的位點(diǎn)有13個(gè)，ABR0007,ABR016

4、9,ABR0204,ABR0280,ABR0287,ABR0319,ABR0329,ABR0379,ABR0522,ADL0268,MCW0036,MCW0058,MCW0145，占1號(hào)染色體微衛(wèi)星標(biāo)記的24.52％。發(fā)生MSI的另外19個(gè)位點(diǎn)，ABR0113，ABR0117，ABR0142等，變化率在4.35％-17.39％之間，發(fā)生了低頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定性MSI-L。還有21個(gè)標(biāo)記用12％聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法沒(méi)有檢測(cè)到變化，這些位點(diǎn)

5、的23個(gè)樣品中都表現(xiàn)穩(wěn)定，屬于微衛(wèi)星穩(wěn)(MSS)。
　　 雞胚成纖維細(xì)胞樣本感染禽白血病病毒后有23/23(100.00％)表現(xiàn)出MSI。不同樣品1號(hào)染色體上MSI統(tǒng)計(jì)結(jié)果表顯示19號(hào)樣品，MSI發(fā)生率最高，為28.30％，其次22號(hào)，14號(hào)，15號(hào)樣品MSI發(fā)生率分別為26.42％，24.53％，20.75％;MSI變化率均在20％以上。MSI變化率在10％-20％的樣品有1號(hào)，2號(hào)，3號(hào)，4號(hào)，5號(hào)，8號(hào)，10號(hào)，13號(hào)，1

6、7號(hào)，18號(hào)，21號(hào)，23號(hào)，共12組樣品，占總樣品數(shù)量的52.17％。只有7組樣品的MSI變化率在10％以下。
　　 首次發(fā)現(xiàn)禽白血病病毒感染雞胚成纖維細(xì)胞1號(hào)染色體上發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，且有4個(gè)位點(diǎn)與雞胚成纖維細(xì)胞感染馬立克氏病毒后均表現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，提示這4個(gè)位點(diǎn)很可能與腫瘤的發(fā)生機(jī)制有關(guān)。大量的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤發(fā)生的早期階段基因組發(fā)生廣泛的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，本研究同樣發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，可能為禽白血病的早期階段研究提供一些