甘薯二氫黃酮醇4-還原酶(DFR)基因的克隆與功能分析.pdf

1、花青素是自然界分布最廣，種類最豐富的色素之一，在植物、藻類及藍細菌中都有重要的生理功能。紫心甘薯因富含花青素，有極強的抗氧化、抑制癌腫及延緩衰老的功能，在食品、醫(yī)藥和化妝品行業(yè)也有著巨大應用潛力，其花青素合成酶關鍵基因的研究是目前最受關注的研究領域之一。本研究分析了不同基因型紫甘薯在不同生育期花青素含量的變化;同一基因型甘薯在遮蔭、地膜覆蓋處理后花青素含量的變化;克隆了花青素合成酶關鍵基因DFR(ibDFR)的全長cDNA，并利用半定量

2、RT-PCR方法分析了ibDFR在不同處理下的mRNA表達情況，結果具體如下:
　　 1.濟薯18的花青素含量在生育期前期較低，35-65d間增加迅速，以后均維持在比較穩(wěn)定的水平，變化很小;通過遮蔭進行弱光處理后，花青素的含量明顯降低;用地膜覆蓋處理后，花青素的含量增加明顯。
　　 2.根據(jù)其它作物的二氫黃酮醇4-還原酶(DFR)基因的保守序列設計引物，利用RT-PCR方法從甘薯塊根中分離出花青素合成相關基因DFR基因，

3、并定名為ibDFR。該基因在基因庫的登錄號為:EU360845，全長1232bp，編碼398aa。氨基酸序列分析表明，與牽牛相似系數(shù)達85％，與煙草的相似系數(shù)達67％，與馬鈴薯的相似系數(shù)達75％。將ibDFR連接到原核表達載體pET30a(+)中，檢測其在大腸桿菌中的表達，SDS-PAGE實驗結果表明ibDFR蛋白質分子量大小與推算一致，能在大腸桿菌中轉錄表達。
　　 3.采用半定量RT-PCR方法，分析ibDFR的mRNA在濟