人羊膜上皮細胞的性質研究.pdf

1、各類心臟疾病導致的心肌損傷和壞死,是目前世界各國的最主要死亡原因之一。即使在當前介入治療、心臟手術和各類藥物治療等多種治療手段下,由心肌損傷和壞死所導致的心力衰竭的治療效果仍舊不甚理想。而以干細胞為基礎的細胞治療和組織工程有望修復損傷心肌,因此成為目前再生醫(yī)學研究中備受關注的熱點。而如何選擇一種最適合應用于臨床細胞治療的種子細胞,是研究者們面對的首要問題和關鍵問題。人羊膜來源干細胞尤其是人羊膜上皮細胞表達多種胚胎干細胞的標記物、具有較全

2、面的多分化潛能,并且因其具有“含量豐富、容易獲取、不引起倫理爭議、無致瘤性、免疫原性低、安全性高”等諸多胚胎干細胞和成體干細胞所不具備的優(yōu)勢和特點,有望成為未來再生醫(yī)學臨床應用的重要種子細胞來源及最適合應用于臨床細胞治療的種子細胞類型。
　　 實驗目的：
　　 1探索足月人羊膜上皮細胞和人羊膜間充質基質細胞類胚胎干細胞性質差異。
　　 2探索足月人羊膜上皮層內不同位置/層面上皮細胞的類胚胎干細胞性質差異。

3、　　 實驗方法：
　　 1人羊膜全層制作石蠟切片,運用免疫組織化學染色法,測定人羊膜各層細胞對多種胚胎干細胞標記物的表達情況；
　　 2分層消化人羊膜上皮細胞和人羊膜間充質基質細胞,對新鮮分離細胞,運用流式細胞學分析、免疫熒光法觀察測定其對多種胚胎干細胞標記物的表達情況；
　　 3在人羊膜上皮層內,分階段消化其不同層面的上皮細胞,運用流式細胞學分析、免疫熒光法觀察測定其對多種胚胎干細胞標記物的表達情況；

4、　　 4經(jīng)胰酶消化去上皮后的人羊膜組織,直接運用免疫組織化學染色法測定存留細胞上皮的特有屬性,同時制作石蠟切片,運用免疫組織化學染色法測定存留細胞對多種胚胎干細胞標記物的表達情況。
　　 實驗結果：
　　 1人羊膜上皮層絕大部分是典型的單層立方上皮,但局部存在多層上皮細胞緊密排列而成的非單層結構。
　　 2人羊膜上皮細胞表達胚胎干細胞標記物SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81和多潛能細胞轉錄因

5、子 Nanog、Oct4、Sox2的水平普遍高于人羊膜間充質基質細胞,但是人羊膜上皮細胞與人羊膜間充質基質細胞二者表達間充質干細胞標記物CD73、CD105的水平無明顯差異。
　　 3人羊膜上皮近表層細胞表達胚胎干細胞標記物SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81和多潛能細胞轉錄因子Nanog、Oct4.、Sox2的水平均明顯低于人羊膜上皮近基底層細胞,尤其表達SSEA4最強最顯著的細胞在形態(tài)上主要為較小的近圓形細

6、胞而在位置分布上主要位于羊膜上皮近基底層處;人羊膜上皮近表層細胞與人羊膜上皮近基底層細胞二者表達間充質干細胞標記物CD73水平未見差異；但是人羊膜上皮近表層細胞表達SSEA1和CK19的水平明顯高于人羊膜上皮近基底層細胞。
　　 4經(jīng)胰酶反復多次消化去上皮后的羊膜組織,其上皮面仍有細胞存留,這些細胞具有上皮屬性,并且比人羊膜全層未消時的上皮細胞更加強烈的表達胚胎干細胞標記物SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81。

7、
　　 實驗結論：
　　 1人羊膜上皮層不是均一的單層上皮,人羊膜上皮內存在多層上皮細胞緊密排列而成的非單層結構。
　　 2人羊膜上皮細胞比人羊膜間充質基質細胞具有更接近胚胎干細胞的性質。
　　 3人羊膜上皮層內尤其是上皮復層區(qū)域內的上皮細胞具有異質性,人羊膜上皮近基底層細胞比人羊膜上皮近表層細胞具有更強的類胚胎干細胞性質,這種異質性和干性差異可能源于人羊膜上皮中含有處于不同分化發(fā)育階段的上皮細胞。胚胎干