大鼠暴發(fā)性肝衰竭動(dòng)物模型腎小球Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受體(IP3RI)表達(dá)的研究.pdf

1、目的:
　　 肝腎綜合征(HRS)是重型肝炎和各種原因引起的肝硬化晚期病人一種常見(jiàn)并發(fā)癥，此時(shí)腎臟只有功能性改變而相對(duì)少見(jiàn)組織學(xué)變化。HRS病人的腎血流和腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR)明顯下降，其標(biāo)志是腎血管收縮。多種機(jī)制可能參與了腎血管收縮，其中血管平滑肌的收縮和舒張又受細(xì)胞內(nèi)Ca2+調(diào)節(jié)。當(dāng)HRS發(fā)生時(shí)，患者血清中許多縮血管活性物質(zhì)(如兒茶酚胺、血管緊張素Ⅱ、血管加壓素、血栓素A2、ET、白三烯等)亦有明顯增高，這些物質(zhì)可以引起細(xì)胞

2、內(nèi)1，4，5-三磷酸肌醇(inositol1，4，5-triphosphate，IP3)合成增加，而增加的IP3必須與1，4，5-三磷酸肌醇受體(inositol1，4，5-triphosphate receptors，IP3Rs)結(jié)合介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鈣釋放，從而引起腎血管收縮和腎小球收縮。IP3Rs中以IP3RI釋放Ca2+的能力最強(qiáng)。腎臟的IP3RI主要存在于腎小球系膜細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞。IP3Rs蛋白的表達(dá)可受多種因素影響。但是在肝衰

3、竭動(dòng)物腎小球IP3RI是否表達(dá)增加尚未明確。
　　 本研究旨在通過(guò)暴發(fā)性肝衰竭大鼠動(dòng)物模型來(lái)觀(guān)察腎臟1型IP3R表達(dá)狀況。為探討肝腎綜合征發(fā)生的病理生理學(xué)機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SPF級(jí)別雄性SD大鼠80只，周齡10-12 wk、體重220±20 g(由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。制備急性肝壞死大鼠模型，根據(jù)不同的處理方法將其隨機(jī)分成4組：分為D-GalN/LPS聯(lián)合給藥組(G

4、/L組)，D-GalN單獨(dú)給藥組(G組)，LPS單獨(dú)給藥組(L組)及NS對(duì)照組。其中G/L組分為5個(gè)時(shí)間點(diǎn)(2h、6h、9h、12h、24h)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取10只大鼠，其余各組均設(shè)置10只大鼠。建模成功后麻醉大鼠，剖腹剪取適量肝臟及腎臟組織，置于組織固定液中，制備石蠟標(biāo)本及樹(shù)脂標(biāo)本。顯微鏡觀(guān)察各組動(dòng)物肝臟及腎臟組織學(xué)變化。電鏡觀(guān)察腎臟組織超微結(jié)構(gòu)的改變。對(duì)各組的腎臟石蠟切片標(biāo)本行免疫組化(過(guò)氧化物酶方法)，檢測(cè)Ⅰ型IP3受體蛋白。DAB

5、顯色后，有棕褐色顆粒著色的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞。
　　 結(jié)果：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)中暴發(fā)性肝衰竭組(G/L組)大鼠總死亡率達(dá)70％，肝臟HE染色可見(jiàn)成片的出血壞死區(qū)，內(nèi)有較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)，證明本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型成功，可以應(yīng)用。腎臟未發(fā)現(xiàn)明顯的病理學(xué)改變。
　　 2.腎臟1型IP3R免疫組織化學(xué)染色在第G、L、NS組的腎組織切片中，1型IP3R表達(dá)很弱的棕褐色信號(hào)，主要分布于腎小球系膜細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的胞漿內(nèi)。而腎小管未見(jiàn)陽(yáng)