芍藥甘草湯含藥血清、芍藥甙對高膽固醇血癥兔oddi括約肌細(xì)胞肌環(huán)收縮活動及三磷酸肌醇(IP3)濃度影響的研究.pdf

1、背景:膽總管末端和胰管末端的環(huán)形平滑肌與膽胰壺腹周圍的環(huán)形平滑肌一起合稱為Oddi括約肌。近年來Oddi括約肌運(yùn)動功能障礙(SOD)逐漸被認(rèn)識:SOD不僅是很多膽道、胰腺疾病發(fā)病的主導(dǎo)環(huán)節(jié)，還是這些疾患關(guān)鍵的繼發(fā)病理改變。探討SOD的發(fā)病機(jī)理和尋找有效的治療方法是當(dāng)前消化病領(lǐng)域的重要課題。中醫(yī)認(rèn)為，SOD屬脅痛、黃疸范疇。芍藥甘草湯常用緩急止痛、肝脾不和、酸甘化陰，具有明顯解痙和舒張平滑肌作用，也可松弛ODDI括約肌，降低其壓力，但確切

2、的機(jī)理還不清楚。研究證明[1-3]:高膽固醇血癥可以引起兔SOD，并且與[Ca2+]i增加和鈣通道改變有關(guān)。本研究采用括約肌肌環(huán)收縮功能測定、ELISA法測IP3濃度等試驗手段，以高膽固醇血癥家兔Oddi括約肌肌環(huán)及肌細(xì)胞為研究對象，研究芍藥甘草湯及其有效成分芍藥甙對高膽固醇血癥兔Oddi括約肌環(huán)、肌環(huán)運(yùn)動及肌細(xì)胞、三磷酸肌醇(IP3)的影響，確定其發(fā)揮調(diào)控作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　 研究芍藥甙對胃腸平滑肌舒張過程中發(fā)現(xiàn)，降低胃

3、腸平滑肌內(nèi)[Ca2+]濃度可誘導(dǎo)其舒張。其主要機(jī)制為:(1)通過抑制[Ca2+]的信使三磷酸肌醇(IP3)(2)使IP3受體/[Ca2+]通道磷酸化從而抑制IP3依賴的[Ca2+]釋放作用(3)通過刺激質(zhì)膜和肌漿網(wǎng)的CA2+-ATPASE泵，增加[Ca2+]的貯存且促使鈣離子從細(xì)胞內(nèi)外流。是否對Oddi括約肌有同樣的舒張作用及相同信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制？
　　 已有文獻(xiàn)報道[4]芍藥甙對高膽固醇血癥家兔離體Oddi括約肌肌環(huán)收縮活動的影響

4、，觀察離體條件的SO，芍藥甘草湯含藥血清對高膽固醇血癥Oddi括約肌具有舒張作用。其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。本實驗是前期研究的進(jìn)一步深入，以高膽固醇血癥家兔為SOD模型，以芍藥甘草湯含藥血清和其有效成分芍藥甙為研究對象，通過ELISA法測兔IP3濃度等手段研究其對高膽固醇血癥家兔Oddi括約肌的作用，從細(xì)胞信息學(xué)和細(xì)胞離子通道角度深入探討它們發(fā)揮作用的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，揭示其調(diào)控Oddi括約肌細(xì)胞（正常和功能障礙時）動力的機(jī)理，從而

5、在一定程度上為臨床芍藥甘草湯治療SOD提供理論依據(jù)。
　　 目的:
　　 1芍藥甘草湯含藥血清對離體高膽固醇血癥兔Oddi括約肌肌環(huán)收縮活動的影響
　　 2芍藥甘草湯含藥血清、芍藥甙對高膽固醇血癥兔體內(nèi)三磷酸肌醇(IP3)濃度的影響
　　 方法:
　　 1)高膽固醇誘發(fā)Oddi括約肌功能紊亂模型建立
　　 按文獻(xiàn)報道（魏經(jīng)國）:純種新西蘭兔16只按隨機(jī)分為為兩組，對照組(control，e

6、oN)和高膽固醇血癥(hypereholesterolemia，HC)模型組每組各8只，對照組以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，實驗組以標(biāo)準(zhǔn)飼料+膽固醇喂養(yǎng)，共飼養(yǎng)八周，誘發(fā)高膽固醇血癥兔
　　 2)Oddi括約肌肌環(huán)制作方法
　　 按文獻(xiàn)報道（張孝勇，世界華人消化雜志）:通過耳緣靜脈注入10ML空氣來處死兔，迅速分離SO段在解剖顯微鏡下去除SO周圍脂肪和結(jié)締組織取其近心段并修剪成橫徑2mm的肌環(huán)。肌環(huán)一端通過不銹鋼絲掛鉤固定在肌傮底部掛

7、鉤上另外一端通過掛鉤與肌肉張力換能器相連接。
　　 3)純種新西蘭兔48只，隨即分為8組，每組6只，芍藥甘草湯灌胃，2次/天，共三天，末次給藥后分別于5分、15分、30分、45分、60分、90分、120分、180分8個時間點經(jīng)股動脈采血，用高效液相色譜儀測定血清中芍藥甙和甘草酸的濃度，繪制血藥濃度曲線，取最高血藥濃度的時間做為含藥血清標(biāo)本的采血時間。
　　 4)高膽固醇血癥兔12只，正常家兔6只，取兔SO段，分為3組，每

8、組6只，ELISA法測量各組SO細(xì)胞IP3濃度。
　　 結(jié)果:
　　 1高膽固醇血癥組SO細(xì)胞內(nèi)IP3濃度較正常組高;
　　 2芍藥甘草湯含藥血清組SO肌環(huán)舒張強(qiáng)度較對照組高
　　 3芍藥甘草湯含藥血清、芍藥甙組IP3濃度明顯低于對照組;
　　 結(jié)論:
　　 1高膽固醇血癥能引起兔SO細(xì)胞內(nèi)IP3濃度升高;
　　 2芍藥甘草湯能舒張兔SO細(xì)胞，并隨給藥濃度的增加，舒張幅度增加