惡性膠質瘤中EGFR和VEGFR2分子靶向聯(lián)合治療的實驗研究.pdf

1、目的：采用傳代的人腦多形性膠質母細胞瘤(glioblastomamultiforme，GBM)新鮮手術標本來建立呈侵襲性生長及表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)高表達的人腦GBM裸小鼠腦原位移植模型，然后在此已建立的能保持親本腫瘤生物學特性的人腦惡性膠質瘤原位移植模型基礎上，把EGFR抑制劑與常規(guī)化療藥物或與血管內皮生長因子受體-2(vascularendothelialgrowth

2、factorreceptor-2，VEGFR2)抑制劑聯(lián)合應用來治療人腦GBM移植瘤，以探討不同作用機理的化學治療藥物聯(lián)合應用后對GBM的療效。
　　 方法：將傳代的新鮮人腦GBM手術標本行裸小鼠右尾狀核接種后第3d用于分組實驗。(1)40只鼠隨機分為4組，10只/組，各組鼠分別應用靶向EGFR的蛋白酪氨酸激酶抑制劑AG1478（25mg/kg.次）、CDDP(3mg/kg.次)、AG1478+CDDP（25mg/kg.次+3m

3、g/kg.次）及磷酸鹽緩沖液（PBS，0.lml/只，次）。PBS和藥物均腹腔注射，每2d一次，共4次，用藥后分別觀察各組荷瘤鼠生存期。再取40只鼠，重復上述實驗，腫瘤移植后14d處死所有組鼠取腦，HE染色后觀察各組移植瘤形態(tài)及體積變化；EnVision和WesternBlot法檢測移植瘤中EGFR、磷酸化EGFR(P-EGFR)、增殖活性(Ki-67labellingindex，即Ki-67LI)、血管內皮生長因子(vasculare

4、ndothelialgrowthfactor，VEGF)、白細胞介素一8（IL-8）和微血管密度(microvesseldensity，MVD)變化；TUNEL法檢測移植瘤細胞凋亡(apoptoticindex即AI)變化。(2)40只荷瘤鼠隨機分為4組，10只/組，分別應用靶向EGFR的單克隆抗體C225(50mg/kg.次)、靶向VEGFR-2的單克隆抗體DCI01（40mg/kg.次）、C225+DC101(50mg/kg.次+4

5、0mg/kg．次)及PBS(0.1ml/只，次)。PBS組和藥物均腹腔注射，每2d一次，共4次。腫瘤移植后14d，處死所有組鼠取腦，HE染色觀察各組移植瘤形態(tài)及體積變化；EnVision法檢測移植瘤中基質金屬蛋白酶-1(matrixmetalloproteinase，MMPl)、MVD及增值活性變化；TUNEL法檢測腫瘤細胞凋亡變化。
　　 結果：(1)與對照組生存期為19.4±0.6d比較，單用CDDP或AG1478后荷瘤鼠生

6、存期分別為20.7±0.4d和20.8±0.6d(P>O.05)，而CDDP+AG1478組荷瘤鼠生存期為33.6±0.gd(P

7、，DC101+C225組移植瘤體積下降了62.9％(PO.05)；DCI01組移植瘤侵襲性加強，移植瘤中MMP1表達為(++)；C225組移植瘤侵襲性下降，移植瘤中MMP1表達陽性(+)；C225+DC101組移植瘤侵襲性也下降，移植瘤中MMPl表達陽性(+)；DCI01組移植瘤中MVD減少了64％(P<0.05)，C225+DC101組MVD減少了68％(P<0.05)，C225組

8、的MVD無明顯變化(P>O.05)；DC101組腫瘤細胞Ki-67LI下降了53.2％(P<0.05)，DC101+C225聯(lián)合用藥后Ki-67LI下降了56.4％(P0.05)；DC1O1誘導細胞AI增加了66.7％(P0.05)。
　　 結論：(1)AG1478與CDDP聯(lián)合