抗人CD133單克隆抗體的制備及CD133抗原在肝癌組織中的表達(dá).pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文抗人CD133單克隆抗體的制備及CD133抗原在肝癌組織中的表達(dá)姓名：陳偉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：吳浩榮20100501中文摘要 抗人C D l 3 3 單克隆抗體的制各及C D l 3 3 抗原在肝癌組織中的表達(dá)靠的物質(zhì)基礎(chǔ)，采用P C R 分段克隆重疊片段，從技術(shù)層面解決了此類長基因克隆的瓶頸。進(jìn)而，本研究將C D l 3 3 基因克隆入真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細(xì)胞L 9 2 9 細(xì)胞，獲得了

2、基因工程細(xì)胞株L - C D l 3 3 ，這為進(jìn)一步研究C D l 3 3 的生物學(xué)功能提供了物質(zhì)基礎(chǔ)，同時，基因工程細(xì)胞株的構(gòu)建也使C D l 3 3 抗原胞外段的天然空間結(jié)構(gòu)充分展示，獲得了后續(xù)的抗人C D l 3 3 單抗得研制過程關(guān)鍵的篩選抗原。鑒于與C D l 3 3 相互作用的生物因子尚未被發(fā)現(xiàn)，利用特異性抗體刺激細(xì)胞膜表面分子是目前能用于激發(fā)C D l 3 3 分子生物學(xué)功能的有效手段。然而目前國際上已有的抗C D l

3、3 3 單抗中，尚無功能性C D l 3 3 的報道。因此，本部分研究在克隆人C D l 3 3 全長基因和建立其基因工程細(xì)胞株的基礎(chǔ)上，進(jìn)而研制抗人C D l 3 3 單克隆抗體，具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。為了進(jìn)一步深入探討C D l 3 3 分子在腫瘤干細(xì)胞的的表達(dá)和臨床意義，獲得探索診斷和治療腫瘤的新手段，本研究以單核細(xì)胞性白血病細(xì)胞株U 9 3 7細(xì)胞株免疫B a l b ／c 小鼠，L - C D l 3 3 基因工程細(xì)胞

4、株為篩選抗原，采用B 淋巴瘤雜交瘤技術(shù)，成功地建立了穩(wěn)定分泌抗人C D l 3 3 單克隆抗體( 6 8 6 ) 的雜交瘤細(xì)胞株，并分離純化單克隆抗體和進(jìn)行了單抗特性的初步鑒定。單抗6 8 6 的識別譜與商品化抗人C D l 3 3 單抗A C l 4 1 類似，該抗體還可用于腸癌組織的免疫組織化學(xué)分析，在腸癌組織標(biāo)本上檢測到C D l 3 3 抗原的表達(dá)。進(jìn)而發(fā)現(xiàn)，單抗6 8 6 可有效抑制C D l 3 3 + 腸癌細(xì)胞C a c

5、o ．2 的增殖。繼而，本研究用自制鼠抗人C D l 3 3 單克隆抗體6 8 6 作為工具，以免疫組織化學(xué)為主要方法對C D l 3 3 抗原在人肝癌組織中的表達(dá)情況進(jìn)行系統(tǒng)的研究，并對其在肝癌組織中的表達(dá)同患者的主要臨床病理特征之間的關(guān)系進(jìn)行探討。研究發(fā)現(xiàn)：單抗6 8 6可用于肝癌組織的免疫組織化學(xué)分析，可在肝癌組織標(biāo)本上檢測到C D l 3 3 抗原的表達(dá)。且大部分標(biāo)本陽性細(xì)胞比率< 1 ％，一般不超過5 ％。這說明C D