CD133、BRAF在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其意義.pdf

1、【目的】：
　　1.評估組織芯片技術(shù)結(jié)合免疫組化技術(shù)在大規(guī)?；仡櫺詫?shí)驗(yàn)中的可行性。
　　2.探討結(jié)直腸癌CD133表達(dá)與臨床病理指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系。
　　3.探討結(jié)直腸癌BRAF蛋白表達(dá)、BRAF基因突變與臨床病理學(xué)指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系。
　　【方法】：
　　1.第一部分:收集2004-2010年南京軍區(qū)福州總醫(yī)院手術(shù)切除經(jīng)病理確診且臨床資料完整結(jié)直腸癌標(biāo)本400例,構(gòu)建組織芯片,采用組織芯片-免疫組化技術(shù)檢測結(jié)

2、直腸腸癌組織中BRAF/CD133蛋白的表達(dá);并進(jìn)行組織芯片與常規(guī)病理切片對比性研究。
　　2.第二部分:采用EliVisionTMplus免疫組化染色方法分別檢測CD133蛋白及BRAF蛋白在400例結(jié)直腸癌組織芯片標(biāo)本中的表達(dá),分析其與臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性。
　　3.第三部分:隨機(jī)選取126例BRAF免疫組化陽性和20例陰性病例,采用直接測序法檢測BRAF基因突變情況,分析其與臨床病理指標(biāo)及患者預(yù)后的關(guān)系。
　　【

3、結(jié)果】：
　　一、免疫組化結(jié)果
　　1.陣列蠟塊完整,無開裂現(xiàn)象,組織蠟芯整齊有序,無移位。經(jīng)顯微鏡觀察不存在無效組織,其著色的細(xì)胞為棕黃色,背景無著色。對于CD133和BRAF分別進(jìn)行常規(guī)切片與組織芯片進(jìn)行對比,發(fā)現(xiàn)兩者符合率高達(dá)93％,Kappa系數(shù)分別為0.714,0.700,說明兩者具有較高的符合率,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.CD133的高表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有明顯相關(guān)性(P<0.05

4、),而與病人年齡、性別、腫瘤部位、大小、分化程度、浸潤深度均無明顯相關(guān)性。Kaplan—Meier生存分析法顯示,CD133低表達(dá)組3年生存率為93.6%,CD133高表達(dá)組3年生存率為76.8%,兩者具有明顯差異(P<0.O1)。
　　3.376例結(jié)直腸癌組織中有226例(60.1%)BRAF陽性,其中BRAF高表達(dá)陽性表達(dá)率為38.8%。其與患者分化程度、及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.05);而與年齡、腫瘤部位、大小、浸潤深

5、度不具有相關(guān)性(P>0.05);BRAF蛋白陽性患者生存率(82.6%)低于陰性患者(96.2%),但統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著差異,其表達(dá)水平亦與患者生存期無明顯相關(guān)(P>0.O5);通過對CD133蛋白及BRAF蛋白進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)兩者具有一定的相關(guān)性(r=0.505)。
　　二、基因突變檢測結(jié)果
　　結(jié)直腸癌中BRAF基因總突變率為8.9%(13/146),其突變與結(jié)腸癌的分期顯著相關(guān),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.

6、05);BRAF基因突變與患者生存期具有相關(guān)性(P<0.05)。
　　【結(jié)論】：
　　1.組織微陣列技術(shù)在大規(guī)模多個(gè)樣本中的研究是可行的,其結(jié)果可信。
　　2.CD133在結(jié)腸直腸癌中表達(dá)顯著升高,并與腫瘤低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān);且CD133可作為判斷結(jié)直腸癌患者預(yù)后的指標(biāo),其表達(dá)水平越高,預(yù)后越差。
　　3.BRAF強(qiáng)陽性表達(dá)與BRAF基因檢測的結(jié)果間存在一定的不一致性,IHC可作為BRAF狀態(tài)的初步篩查方