孔雀石綠單克隆抗體的研制及ELISA檢測方法的建立.pdf

1、孔雀石綠單克隆抗體的研制及ELlSA檢測方法的建立PreparationofmonoclonalantibodiesagainstmalachitegreenanddevelopmentofanELISAmethod研究生：劉云迎導(dǎo)師：王捍東教授學(xué)科：臨床獸醫(yī)學(xué)MSCandidate：YunyingLiuSupervisor：ProfHandongWang揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院臨床獸醫(yī)學(xué)系2014年6月?lián)P州大學(xué)碩士學(xué)位論文II雜交瘤細胞，分別

2、命名為1811、1E5和487，其中1811和1E5所制腹水抗體效價較好，分別為1：16，000和1：32，000。蛋白濃度分別為3169mg／mL和2889mg／mL。3ELISA檢測方祛的建立。利用1E5雜交瘤細胞制得的小鼠腹水，建立檢測MG和LMG殘留的間接競爭ELISA法。包被原最佳稀釋濃度為1：8，000，腹水最佳工作濃度為1：16，000。利用LMG作出藥物抑制標準曲線，其線性方程為y=04586x01801(R2=O995

3、4)，半抑制濃度IC50為304ng／mL，檢測下線LOD低于25ng／mL，定量限LOQ為517ng／mL。交叉實驗表明，該單抗對LMG的抑制率為100％，與MG的交叉反應(yīng)率為714％，與副品紅、甲基藍、結(jié)晶紫、氯霉素和羅丹明B等無交叉反應(yīng)。4模擬實驗。通過模擬實際生產(chǎn)中孔雀石綠的使用，獲得殘留有LMG的樣品，同時設(shè)空白對照組。對樣品前處理，當樣品處理液稀釋6倍時，樣品基質(zhì)干擾基本消失，在5200ng／mL范圍內(nèi)建立CiELISA標準