一株禽H1N1流感病毒血凝素蛋白的純化、鑒定和結構分析.pdf

1、甲型流感是含有八個負鏈RNA片段的RNA病毒,共編碼11種蛋白質(zhì)。其中的血凝素蛋白(HA),是流感病毒主要的表面蛋白之一,負責與宿主細胞受體結合而啟動病毒感染。目前研究表明,HA具有受體結合偏好性,禽流感病毒HA偏好Siaα2,3Gal糖受體,人流感病毒HA偏好Siaα2,6Gal糖受體。所以,禽流感病毒不能在人類中有效復制,人流感病毒也不能通過天然途徑在水禽中有效復制。如果禽流感病毒要感染人,必須和人流感病毒共同感染被稱為“基因混合器

2、”的中間宿主豬,重組獲得新的受體結合偏好性。然而,引發(fā)1997年香港禽流感病毒感染人事件的禽H5N1流感病毒株仍然具有Siaα2,3Gal糖受體偏好性,這說明HA的受體結合偏好性理論可能不適應于一些禽流感病毒亞型。
　　因為H1N1流感病毒感染人類歷史記錄最長,而且和H3N2共同流行于人類、豬和禽類中,是研究流感病毒宿主適應性和跨種傳播的理想模型。所以本論文以一株禽H1N1流感病毒A/WDK/JX/12416/2005為主要研究對

3、象,首先綜合應用雞胚培養(yǎng)病毒、超速離心、蔗糖密度梯度離心、酶切、堿性陰離子交換、透析、SDS-PAGE電泳等技術,獲得了高純度HA蛋白。這是一套直接從病毒顆粒上獲得流感病毒血凝素蛋白的方法,這種方法確保所獲得的血凝素蛋白分子結構同病毒顆粒上的血凝素蛋白高度一致。
　　在用質(zhì)譜進一步鑒定純化的HA蛋白時,通過和HA基因序列比較發(fā)現(xiàn),HA蛋白序列有七個氨基酸置換位點,分別是E103K,R130K,T169I,I338V,N387S,S

4、398I/L和I399S。因為流感病毒使用不同的聚合酶機制進行復制和轉錄,這些置換可能是在基因復制過程引入,也可能是在病毒mRNA轉錄過程引入。這個結果,第一次提供了流感病毒HA蛋白氨基酸序列和HA基因序列不一致的實驗證據(jù)。
　　本文通過X射線衍射解出第一株禽H1N1流感病毒HA以及其與人、禽流感病毒受體類似物復合物的晶體結構。結果發(fā)現(xiàn),除了糖基化方式外,禽流感病毒HA和哺乳動物流感病毒HA的結構大體相似,而且并沒有表現(xiàn)出偏好Si