老鼠皮膚前體細(xì)胞中側(cè)群細(xì)胞的分選及特性分析.pdf

1、目的：檢測和分選SKPs中的側(cè)群細(xì)胞（SP），并對其體外增殖和分化能力進(jìn)行初步分析。
　　 方法：選擇經(jīng)過培養(yǎng)的SKPs細(xì)胞群，以Hoechst33342和PI 熒光染料染色，維拉帕米拮抗對照，應(yīng)用流式細(xì)胞儀熒光激活分選法檢測SP細(xì)胞。SP細(xì)胞和MP細(xì)胞同時(shí)分類收集，分別添加培養(yǎng)基和生長因子培養(yǎng)。收集經(jīng)2 次傳代培養(yǎng)后的SP細(xì)胞重懸，接種于24 孔培養(yǎng)皿，誘導(dǎo)其向神經(jīng)元和許旺細(xì)胞分化。利用免疫熒光細(xì)胞技術(shù)和RT-PCR技術(shù)檢測S

2、P細(xì)胞和分化后細(xì)胞的特殊標(biāo)記物。
　　 結(jié)果：通過FACS 法從SKPs細(xì)胞懸液中分離出SP細(xì)胞，稱為皮膚前體細(xì)胞的側(cè)群細(xì)（SKP-SP)，其比例為0.1％.相對MP細(xì)胞，SP細(xì)胞具有更強(qiáng)的細(xì)胞增殖能力，能長期傳代培養(yǎng)。免疫熒光和RT-PCR檢測結(jié)果顯示，SP細(xì)胞表達(dá)SKPs的特殊標(biāo)記物Nestin和Fibronectin。分化后的細(xì)胞分別表達(dá)神經(jīng)元的特殊標(biāo)記物NeuN，NF-M，和許旺細(xì)胞的特殊標(biāo)記物GFAP，S100。