B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蠅細(xì)胞中的表達(dá)與純化.pdf

1、目的：在果蠅表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)并獲得高純度的B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitisBvirusXprotein，HBx)。 方法：PCR擴(kuò)增獲得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因(分別為Xb及Xc)，以AgeI及BgllI位點(diǎn)將其克隆入果蠅表達(dá)載體pMT／BiP／V5／HisC，構(gòu)建相應(yīng)的重組表達(dá)載體。重組載體與篩選質(zhì)粒pCoBlast以脂質(zhì)體Cellfectine共轉(zhuǎn)染果蠅S2細(xì)胞，25gg／mlBlasticidin篩選

2、獲得多克隆抗性細(xì)胞株。擴(kuò)增細(xì)胞并以CuS04誘導(dǎo)HBx蛋白表達(dá)，Western—Blot鑒定表達(dá)產(chǎn)物并確定最佳的蛋白表達(dá)時(shí)間和誘導(dǎo)濃度。大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)表達(dá)，用兩種方法純化獲得高純度的B、C基因型HBx。 結(jié)果：1、成功構(gòu)建了B、C基因型乙型肝炎病毒X基因的重組質(zhì)粒pMT／BiP-Xb'HisC和pMT／BiP-Xc-HisC；2、獲得穩(wěn)定表達(dá)HBx融合蛋白的S2細(xì)胞株，確定了融合蛋白在S2細(xì)胞中表達(dá)的最佳時(shí)間是誘導(dǎo)后72h