葡萄球菌腸毒素A和黑色素瘤抗原A3構建的真核共表達質粒在小鼠體內抗喉癌的效應.pdf

1、1 SEA和喉癌MAGE-A3構建的真核質粒pMAGEA3-IRES-SEA經(jīng)過電穿孔轉染在小鼠體內的轉錄
　　目的：檢測真核質粒pMAGEA3-IRES-SEA經(jīng)過電穿孔轉染在小鼠中的轉錄。
　　方法：將葡萄球菌腸毒素A（staphylococcal endotoxin A，SEA）和喉癌來源的黑色素瘤抗原A3（melanoma-associated antigen A3，MAGE-A3），構建成基因共表達的真核質粒pMA

2、GEA3-IRES-SEA。將pMAGEA3-IRES-SEA用電轉染的方法免疫BALB/C小鼠單側股四頭肌，每兩周一次，每次注射50μg，共免疫三次。末次免疫兩周后，取注射部位組織，用熒光定量 PCR（qRT-PCR）法檢測目的基因在注射部位肌肉中的轉錄情況。
　　結果：在實驗小鼠注射部位的骨骼肌內檢測到SEA、MAGE-A3基因轉錄mRNA。
　　結論：所構建的 pMAGEA3-IRES-SEA真核表達質粒，可通過電轉染

3、的方式，在小鼠體內能有效地轉錄。這為研究該質粒通過小鼠的體內轉錄蛋白的表達，誘導機體細胞免疫、體液免疫來清除喉癌，奠定了理論基礎。
　　2喉癌來源黑色素瘤抗原的真核質粒在小鼠黑色素瘤細胞模型的表達
　　目的：測定 pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核質粒在小鼠黑色素瘤 B16細胞的穩(wěn)定表達，建立表達MAGE-A3腫瘤細胞模型。
　　方法：將喉癌來源的黑色素瘤抗原A3（melanoma-associated ant

4、igen A3，MAGE-A3）構建成真核質粒pIRES2-EGFP/MAGE-A3，脂質體法將pIRES2-EGFP/MAGE-A3轉染小鼠黑色素瘤B16細胞，G418篩選陽性克隆，然后熒光顯微鏡檢測陽性克隆中增強型綠色熒光蛋白（Enhanced green fluorescent protein，EGFP）的表達，熒光定量PCR（qRT-PCR）檢查MAGE-A3在B16細胞中的轉錄。
　　結果： pIRES2-EGFP/MA

5、GE-A3真核質粒轉染B16細胞后篩選得到陽性克隆，可見融合蛋白表達產(chǎn)生明亮的綠色熒光，qRT-PCR可檢測到MAGE-A3 mRNA的轉錄。
　　結論： pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核質粒通過脂質體法能有效轉染，并在B16穩(wěn)定表達，成功建立了MAGE-A3腫瘤細胞模型。
　　3葡萄球菌腸毒素A和黑色素瘤抗原A3構建的真核質粒在小鼠體內抗喉癌的效應
　　目的：觀察真核質粒 pMAGEA3-IRES-SEA免

6、疫小鼠后，鼠脾淋巴細胞對喉癌細胞模型B16/MAGE-A3的殺傷作用。
　　方法：先期將葡萄球菌腸毒素A（staphylococcal endotoxin A，SEA）和喉癌來源的黑色素瘤抗原A3（melanoma-associated antigen A3，MAGE-A3），構建成基因共表達的真核質粒pMAGEA3-IRES-SEA，用電轉染的方法免疫BALB/C小鼠單側股四頭肌。末次免疫兩周后，取脾分離淋巴細胞，與B16/MA