人乳頭瘤病毒—黑色素瘤抗原CTL表位嵌合基因克隆及其表達.pdf

1、目的：構(gòu)建人乳頭瘤病毒(HPV)6b型結(jié)構(gòu)蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)細胞毒T淋巴細胞(CTL)表位的嵌合基因，通過基因克隆并在昆蟲細胞中表達，為進一步研究其免疫原性、免疫學效應(yīng)及制備HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗治療胃腸道腫瘤提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。 方法：選擇HPV6bL1基因和MAGE-A3上的CTL表位氨基酸序列的基因，將MAGE-A3CTL表位基因插入到HPV6bL1的羧基端序列中。用Pre

2、mier5.0和Vector軟件設(shè)計HPV6bL1/MAGE-A3-CTL(899-924)嵌合基因的特異性引物(ozlf-17)，以質(zhì)粒pVL1393/HPV6bL1/16E7為模板，經(jīng)PCR擴增，將PCR擴增產(chǎn)物與PUCm-T載體連接，轉(zhuǎn)入大腸桿菌E.ColiJM109感受態(tài)細胞形成TA克隆，通過氨芐耐藥基因進行藍白斑篩選，提取陽性克隆菌株的質(zhì)粒DNA，進行PCR鑒定和限制性核酸內(nèi)切酶BamHI和HindⅢ雙酶切鑒定。 結(jié)論

3、：1.成功克隆了HPV6bL1/MAGE-A3-CTL899-924嵌合基因。2.成功構(gòu)建了pFastBacTM1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL899-924質(zhì)粒。3.獲得了重組桿狀病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL899-924。4.重組桿狀病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL899-924感染sf-9昆蟲細胞經(jīng)SDS-PAGE電泳、考馬斯亮藍染色和Western-blot分析鑒定，