BNCT治療人黑色素瘤的初步探討.pdf

1、研究目的：探討硼中子俘獲療法（boron neutron capture therapy,BNCT）對(duì)人黑色素瘤A375細(xì)胞的殺傷機(jī)制，同時(shí)建立人腦黑色素瘤細(xì)胞裸小鼠動(dòng)物模型，為進(jìn)行硼中子俘獲療法體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。
　　研究方法：將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A375細(xì)胞株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組，設(shè)：
　?。?）對(duì)照組，A375細(xì)胞不進(jìn)行任何照射。
　?。?）γ射線照射組，為60CO照射處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A375細(xì)胞，應(yīng)用劑量分別為2

2、Gy和4Gy。
　　（3）醫(yī)院中子照射器（In-Hospital Neutron Irradiator,IHNI-1）組，為將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A375細(xì)胞直接用IHNI-1產(chǎn)生的中子進(jìn)行照射，應(yīng)用劑量分別為2Gy和4Gy。
　?。?）BNCT組，為將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A375細(xì)胞放入5mmol/l的含硼化合物二羥基苯丙氨酸硼（boronophenylalanine,BPA）果糖復(fù)合物中，孵育后用IHNI-1產(chǎn)生的中子進(jìn)行照射，

3、應(yīng)用劑量分別為2Gy和4Gy。
　　本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用感應(yīng)耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀（ICP-AES）檢測(cè)人黑色素瘤細(xì)胞株A375吸收BPA的情況；采用IHNI-1對(duì)含硼（boron-10,10B） A375細(xì)胞進(jìn)行照射；利用MTT法檢測(cè)A375細(xì)胞增殖率，流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測(cè)A375細(xì)胞凋亡情況，Western blot檢測(cè)A375胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞色素c和caspase-9的水平；最后將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人黑色素瘤細(xì)胞A375細(xì)胞株接種于BAL

4、B/c裸小鼠顱內(nèi)，常規(guī)HE和免疫組織化學(xué)染色，然后用普通光鏡觀察移植瘤細(xì)胞的形態(tài)特征。
　　結(jié)果：
　?。?）黑色素瘤A375細(xì)胞株吸收10B濃度24小時(shí)至最高，可達(dá)2.884±0.148μg/107細(xì)胞，超過(guò)24小時(shí)10B濃度出現(xiàn)開(kāi)始下降的趨勢(shì)。
　?。?）單純BNCT對(duì)黑色素瘤A375細(xì)胞的殺傷作用明顯強(qiáng)于γ射線照射。
　?。?）對(duì)富含10B的黑色素瘤A375細(xì)胞，經(jīng)BNCT后其生存比例和增殖率較其他各組顯著

5、下降。同時(shí)發(fā)現(xiàn)黑色素瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞色素c水平明顯上升，caspase-9水平顯著增加。
　?。?）A375細(xì)胞可以成功種植于BALB/c裸小鼠顱內(nèi)，對(duì)腦內(nèi)模型常規(guī)HE檢查均見(jiàn)有腫瘤生長(zhǎng)，成瘤率達(dá)100%，成功建立了黑色素瘤顱內(nèi)裸小鼠模型。
　　結(jié)論：BNCT對(duì)人黑素瘤細(xì)胞株A375具有明顯的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡的作用；BNCT殺傷黑色素瘤細(xì)胞的機(jī)制可能通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；人腦黑色素瘤細(xì)胞動(dòng)物模型的建立可以為以后BNC