大連市流感病毒血凝素基因遺傳特性研究.pdf

1、目的:了解2005～2009年大連市流感流行情況;對分離流感病毒株血凝素(HA)基因進行核苷酸序列測定和氨基酸序列的推導,與最近流行代表株進行比較,及時發(fā)現(xiàn)流感病毒新變異株,為疫苗株選擇等流感防治工作提供科學依據。
　　 方法:收集大連市流感監(jiān)測哨點醫(yī)院門診就診病例和流感樣病例(ILI,influenza-likeillness)，將來自監(jiān)測哨點醫(yī)院的流感樣病例咽拭子標本用狗腎傳代細胞(MDCK)培養(yǎng)和分離流感病毒,用紅細胞和流

2、感病毒標準參考血清進行鑒定分型。提取病毒RNA,利用RT-PCR方法擴增出HA基因片斷,對擴增產物進行核苷酸序列測定,用DNAStar軟件與流行株代表株、疫苗株進行序列比較,分析其核苷酸序列和氨基酸序列的同源性及變異情況,以及變異對流感病毒抗原性改變的意義。
　　 結果:
　　 1、在2005年01月～2009年3月共采集流感樣病例1291份咽拭子標本,經MDCK細胞分離出流感病毒87株,其中H1N1亞型流感病毒39株,

3、占分離毒株的44.83％;H2N3亞型流感病毒16株,占分離毒株的18.39%;乙型流感病毒32株,占分離毒株的36.78%。
　　 2、H1N1亞型流感病毒HA1基因分析結果表明:05～09年大連市分離到的H1N1亞流感病毒的核苷酸同源性為:97.3%～99.9%。05～06年分離株與2004～2007年國際疫苗株A/New caledonia/20/1999(H1N1)相比較,核苷酸同源性為98.6%～99.2%;2007年

4、分離株與2007～2008年流感疫苗株A/Solomon Islands/3/2006相比較,核苷酸同源性為95.8%～97.3%;08～09年分離株與08～09年疫苗代表株A/Brisbane/59/2007(H1N1)相比較,核苷酸同源性為96.9%～99.5%。與本年度的疫苗株相比,2005、2006、2007和2008年分離株的HA1區(qū)分別發(fā)生了11個、9個、15、15個突變。
　　 3、H2N3亞型流感病毒HA1基因分

5、析結果表明:H3N2亞型流感病毒株與同時期的H3N2亞型流感疫苗株A/Fuiian/411/2002、A/Wisconsin/67/2005相比其抗原性變異不大,核苷酸同源性為98.00%～99.10%,氨基酸同源性為97.40%～98.20%。2005年和2007年分離株與本年疫苗株比較分別有6個、14個氨基酸位點發(fā)生了替換,分別包含一個抗原決定簇197(S＞N)和194(V＞G)。
　　 4、乙型流感病毒HA1基因分析結果表

6、明:2007～2008年大連市流行乙型Yamagata系流感毒株。與疫苗標準株B/Shanghai/361/02相比,核苷酸同源性為97.3～97.8%,有8個氨基酸位點發(fā)生改變,在196位增加了一個糖基化位點。
　　 5、基于對2005年至2009年的63株流感病毒HA基因測序及分析的基礎上,對大連市流感病毒的流行強度進行了預測,預測結果與實際情況基本相符。
　　 結論:
　　 1、2008～2009大連市流行

7、的H1N1亞型流感毒株與WHO推薦的疫苗株A/wisconsin/67/05相比已經發(fā)生一定變化;不同時間及地區(qū)流行的流感毒株也有差異。
　　 2、大連市05、07年流行的H2N3亞型流感病毒,與前幾年流行的H2N3亞型流感病毒相比已發(fā)生變異,05、07年疫苗代表株A/Fujiaa/411/2002、A/Wisconsin/67/2005對大連市流行的H3亞型病毒有較好的預防作用。
　　 3、2007～2008大連市流行