BMP9通過(guò)Erk5信號(hào)通路調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化.pdf

1、目的：初步分析絲裂原活化蛋白激酶ERK5在骨形成蛋白9誘導(dǎo)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2、小鼠成骨細(xì)胞株MC3T3、小鼠成肌細(xì)胞株C2C12、小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MZF成骨分化過(guò)程中的作用。
　　方法：利用BMP9重組腺病毒感染C3H10T1/2、MC3T3、C2C12、MEF細(xì)胞，western blot檢測(cè)ERK5激酶總蛋白表達(dá)情況和磷酸化情況。ERK5的特異性抑制劑S1531抑制ERK5活性后，分析ALP活性變化，利用茜素

2、紅S染色檢測(cè)鈣鹽沉積，Real Time PCR檢測(cè)Runx2和Smad7的mRNA表達(dá)水平，RT-PCR檢測(cè)Id-1，Id-2，Id-3，CTGFmRNA表達(dá)水平，western blot檢測(cè)Runx2，Smad1/5/8，OPN，OCN蛋白表達(dá)水平，熒光素酶活性檢測(cè)Smad1/5/8活性。
　　結(jié)果：BMP9不影響ERK5激酶的蛋白表達(dá)水平，但卻可以促進(jìn)ERK5激酶的磷酸化；ERK5抑制劑S1531可劑量依賴性地抑制由BMP9

3、誘導(dǎo)的C3H10T1/2、MC3T3、C2C12、MEF細(xì)胞的堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)活性，S1531還可劑量依賴性地抑制BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2、C2C12、MEF細(xì)胞的鈣鹽沉積；BMP9的靶基因Id-1，Id-2，Id-3，CTGF和Smad7的mRNA水平可以被ERK5特異性抑制劑S1531抑制；BMP9-Smad經(jīng)典通路中的Smad1/5/8磷酸化水平和熒光素酶活性也被S1531所抑制