《內(nèi)經(jīng)》地域養(yǎng)生思想探討及恩施道地中藥材對(duì)模式生物四膜蟲(chóng)的抗氧化作用研究.pdf

1、目的：本研究通過(guò)對(duì)《內(nèi)經(jīng)》地域養(yǎng)生思想的歸納總結(jié)，闡釋地域的差異對(duì)人類的體質(zhì)、疾病、治療、壽命長(zhǎng)短以及氣候的形成等方面有著直接的影響，為人們改良生活方式、提高環(huán)境健康、運(yùn)用道地藥材提供依據(jù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)遵循《內(nèi)經(jīng)》地域養(yǎng)生思想理論指導(dǎo)，建立模式生物四膜蟲(chóng)中藥篩選平臺(tái)，采用恩施道地藥材——竹節(jié)參中的有效成分竹節(jié)參總皂苷(TSPJ，Total Saponins of Panax japonicus)直接干預(yù)模式生物的方法，觀察藥物

2、對(duì)模式生物的抗氧化作用等實(shí)驗(yàn)研究，初步探討中藥有效成分干預(yù)模式生物抗氧化機(jī)制。
　　 方法：主要采用藥物直接添加入培養(yǎng)基的方法干預(yù)四膜蟲(chóng)，觀察中藥材水提液直接添加對(duì)四膜蟲(chóng)壽命的影響。
　　 將嗜熱四膜蟲(chóng)在無(wú)菌培養(yǎng)液的24孔板中加入配制好的16mg/ml竹節(jié)參總皂苷(TSPJ)溶液，接種適量對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的嗜熱四膜蟲(chóng)培養(yǎng)液，每個(gè)濃度分3個(gè)平行，另設(shè)空白對(duì)照，30℃培養(yǎng)。分別在不同溫育時(shí)間取樣計(jì)數(shù)，得出最佳濃度。之后使用超聲處理

3、機(jī)(φ2)破碎細(xì)胞，將四膜蟲(chóng)裂解之后的液體以12000r.min-1離心20 min，取上清液。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性。運(yùn)用Q-PCR測(cè)定GPX-4、TXNRD2基因mRNA表達(dá)，每個(gè)標(biāo)本均進(jìn)行GPX-4mRNA、TXNRD2mRNA和內(nèi)參18s基因的熒光定量PCR。根據(jù)NCBI、TGD中四膜蟲(chóng)GPX-4mRNA、TXNRD2mRNA和內(nèi)參18s基因序列行引物設(shè)計(jì)。
　　 結(jié)果：
　　 1

4、.四膜蟲(chóng)超氧化物歧化酶(T-SOD)活性的測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)是生物體內(nèi)極為重要的抗氧化酶，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用。本實(shí)驗(yàn)分析了竹節(jié)參總皂苷(TSPJ)對(duì)嗜熱四膜蟲(chóng)細(xì)胞SOD酶活性的影響。結(jié)果表明，嗜熱四膜蟲(chóng)細(xì)胞T-SOD的活性隨著ρ(TSPJ)的增加而增加(P＜0.01)。
　　 2.不同濃度的竹節(jié)參總皂苷對(duì)GPx-4 mRNA、 TXNRD2mRNA的影響GPx-4 mRNA、 TXNRD2mRN

5、A基因在各組均有表達(dá)，經(jīng)過(guò)低濃度和高濃度藥物干預(yù)后，與空白組比較，嗜熱四膜蟲(chóng)的GPx-4 mRNA、 TXNRD2mRNA表達(dá)均顯著升高，差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、地域環(huán)境因素的差異直接影響著人類的體質(zhì)、疾病、治療、壽命長(zhǎng)短以及氣候的形成等方面;順應(yīng)《內(nèi)經(jīng)》地域養(yǎng)生思想不僅可以有效地提高人類軀體健康，制定最符合個(gè)體的健康生活方式，而且對(duì)于環(huán)境健康的提高也有著十分重要的意義。