高產(chǎn)酸性脲酶菌株的篩選及該酶在黃酒中的應(yīng)用.pdf

1、氨基甲酸乙酯(EC)作為一種潛在致癌物，廣泛的存在于發(fā)酵食品和酒精飲料中。在各種發(fā)酵酒中，黃酒面臨的EC超標(biāo)問題更為突出。國內(nèi)外眾多學(xué)者針對(duì)酒精飲料中EC含量超標(biāo)的問題提出了很多解決策略，其中，利用酸性脲酶消除其前體物質(zhì)尿素被認(rèn)為是最為有效的一種方法。
　　本論文研究的內(nèi)容包括高產(chǎn)酸性脲酶菌株的篩選和鑒定、菌株發(fā)酵產(chǎn)酶條件的優(yōu)化、酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)的研究以及酶在黃酒中的應(yīng)用效果初探。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)以小鼠糞

2、便、合肥豆制品廠和乳制品廠的污泥為來源，通過初篩和復(fù)篩篩選到一株產(chǎn)酸性脲酶能力較高的菌株，酶活為1.12U/mL，根據(jù)菌株的形態(tài)特征、部分生理生化實(shí)驗(yàn)鑒定以及16S rDNA序列分析，確定該菌株為Staphylococcus cohnii命名為Staphylococcus cohnii HFUTY-08。
　　(2)通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)菌株的發(fā)酵產(chǎn)酶條件和提酶條件進(jìn)行優(yōu)化，得到的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基成分為:葡萄糖3％，蛋白胨1％，

3、酵母膏0.5％，牛肉膏0.5％，KH2PO40.2％，NaCl0.5％，NaAc0.2％，尿素0.5％，四水硫酸錳0.005％，六水硫酸鎳0.005％，初始pH5;最佳培養(yǎng)條件為:接種量5％，培養(yǎng)時(shí)間26h，培養(yǎng)溫度32℃，轉(zhuǎn)速為200r/min;最佳提酶條件為:超聲功率400W，超聲時(shí)間20min（開2S，停4S），優(yōu)化后的酸性脲酶活力達(dá)到1.98U/mL，提高了1.8倍。
　　(3)粗酶液通過乙醇分級(jí)沉淀、超濾、DEAE-52

4、離子交換層析、葡聚糖凝膠G-200凝膠過濾層析等方法進(jìn)行分離純化，得到了一定純度的酶。全酶分子量約為295Kda，SDS-PAGE顯示出該酶由三個(gè)亞基α(65kDa)，β(18kDa)，γ(14.5kDa)組成，組成形式為(αβγ)3。然后對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果表明:該酶最適反應(yīng)溫度為35℃，溫度穩(wěn)定范圍為25～45℃，最適反應(yīng)pH為4.5，pH值穩(wěn)定范圍為4～6，酶在4℃下保存60天仍具有80％以上的酶活;酶的Km值為13.6mm