高產(chǎn)單寧酶菌株的選育及應用研究.pdf

1、單寧酶（Tannase, EC3.1.1.20）也稱酯酰水解酶，是一種誘導酶。它能夠水解單寧中的酯鍵和縮酚酸鍵，最終生成沒食子酸和葡萄糖。論文研究了以黑曲霉B0201為出發(fā)菌株，通過常壓室溫等離子體誘變系統(tǒng)進行誘變，篩選獲得產(chǎn)單寧酶菌株B1401，對該菌株液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶條件進行研究，對該菌株產(chǎn)酶直接轉(zhuǎn)化單寧酸生成沒食子酸工藝條件進行研究，并初步探討在5L發(fā)酵罐轉(zhuǎn)化沒食子酸的實驗條件，獲得以下結(jié)論。
　　采用常壓室溫等離子體誘變系統(tǒng)對

2、黑曲霉 B0201菌株進行誘變，在平板培養(yǎng)基中，添加0.004％的溴酚藍為指示劑，菌株產(chǎn)單寧酶降解培養(yǎng)基中的單寧酸得到?jīng)]食子酸，使指示劑變色，根據(jù)所形成的變色圈直徑和菌落直徑的比值進行初篩。再通過發(fā)酵產(chǎn)酶進行復篩。成功的選育到了一株產(chǎn)單寧酶酶活達17.6 U·g-1的黑曲霉高產(chǎn)菌株B1401。它的單寧酶活性是原始出發(fā)菌株的酶活力8.94 U·g-1的2倍。
　　研究了黑曲霉 B1401在液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶條件，對培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件等產(chǎn)

3、酶工藝條件進行初步探究，并通過正交驗證實驗，確定了最適宜的單寧酸濃度為5%，葡萄糖濃度為2.5%，裝液量為90 mL，接種量為2%。
　　探索了在最佳產(chǎn)酶條件下直接添加單寧酸制備沒食子酸的工藝，并對其轉(zhuǎn)化時間、轉(zhuǎn)化底物濃度、轉(zhuǎn)化 pH值、轉(zhuǎn)化溫度、轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)速等單因素進行了研究。最佳轉(zhuǎn)化條件為：轉(zhuǎn)化時間48 h，單寧酸累計濃度在20.4%，轉(zhuǎn)化液pH為4.0，轉(zhuǎn)化溫度30℃，轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)速160 r·min-1，沒食子酸濃度達到128 mg