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1、大腸桿菌解螺旋酶Ⅱ(UvrD)是一種在甲基定向錯(cuò)配修復(fù)(methvl-directed mismatch repair,MMR)和核苷酸切除修復(fù)(nucleotide excision repair)中起作用的3’→5’SF1解旋酶。它可以通過(guò)結(jié)合和水解ATP,將雙鏈DNA解鏈。本研究從大腸桿菌K12基因組中擴(kuò)增出uvrD基因,將其克隆到pET-28a中,構(gòu)建出原核表達(dá)載體pET-28a-uvrD,并在大腸桿菌中大量誘導(dǎo),為可溶性的表達(dá)
2、。利用鎳親和柱純化和透析后,經(jīng)SDS-PAGE分析表明UvrD的純度為90%以上。通過(guò)ATP酶活性檢測(cè)試劑盒測(cè)定每μg UvrD蛋白的ATP酶活性為0.087U。利用表面等離子共振(surface plasmon resonance,SPR)方法,測(cè)定和比較了UvrD與同源雙鏈分子(homoduplex)和異源雙鏈分子(heteroduplex)結(jié)合的動(dòng)力學(xué),以及鎂離子對(duì)此過(guò)程的影響。結(jié)果顯示,UvrD與DNA的平衡解離常數(shù)在10<'-
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