達(dá)沙替尼抑制鼻咽癌細(xì)胞侵襲及誘導(dǎo)其凋亡的作用.pdf

1、目的：鼻咽癌系我國(guó)高發(fā)的頭頸部惡性腫瘤，具有家族及地區(qū)聚集性。臨床上，就診的患者大多已為 III，IV期，單純的放射治療已經(jīng)不能滿足治療需要，化療作用有限，需要新的治療藥物出現(xiàn)。鼻咽粘膜的正常組織與癌組織中都有 c-Src的表達(dá)，癌組織中表達(dá)明顯增高，且鼻咽癌組織中c-Src表達(dá)分別與其與臨床分期、預(yù)后不良密切相關(guān)。故Src也可以作為NPC全身治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。Src激酶家族系非受體酪氨酸蛋白激酶，其家族成員已發(fā)現(xiàn)有9個(gè)，這些產(chǎn)物都是

2、具有蛋白酪氨酸激酶活性的蛋白質(zhì)。它們由特殊結(jié)構(gòu)域組成，分子構(gòu)型極其相似，參與多條細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)，分化，增殖，遷移等生理過(guò)程均能發(fā)揮重要的作用。其中Src作為人類(lèi)首先發(fā)現(xiàn)的原癌基因c-Src編碼的蛋白激酶，其活化與多種人類(lèi)惡性腫瘤發(fā)生及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)。因此,Src激酶被作為一個(gè)治療癌癥的重要靶點(diǎn)，Src激酶抑制劑可能為癌癥的治療提供新的方法。本研究旨在研究Src激酶抑制劑達(dá)沙替尼在體外對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的抑制作用。
　　方法

3、：選擇人鼻咽癌細(xì)胞系CNE2，應(yīng)用不同濃度的達(dá)沙替尼處理，分別使用Western blot分析蛋白及磷酸化蛋白表達(dá)水平，MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡及Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，了解達(dá)沙替尼應(yīng)用后，NPC細(xì)胞增殖，凋亡及遷移能力的變化。
　　結(jié)果：
　　1）應(yīng)用不同濃度的達(dá)沙替尼處理細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，隨著藥物濃度的增高，鼻咽癌細(xì)胞的增殖能力呈現(xiàn)出被抑制效應(yīng)明顯增強(qiáng)的現(xiàn)象。
　　2）隨

4、著藥物濃度的增加，phospho-AKT（Ser473）、phospho-MEK（ser217/221）、phospho-ERK（tyr204）的蛋白水平呈現(xiàn)明顯的降低趨勢(shì),提示達(dá)沙替尼主要抑制MAPK和PI3K／AKT信號(hào)通路的活性，從而抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)及增殖。
　　3）隨著達(dá)沙替尼的濃度增加，發(fā)現(xiàn)達(dá)沙替尼抑制Src的磷酸化活性的能力明顯增強(qiáng)，但對(duì)Src的總蛋白影響不大。
　　4)達(dá)沙替尼能夠明顯濃度依賴(lài)性地誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生晚期

5、凋亡，即PI和AnnexinV染色雙陽(yáng)性的細(xì)胞比例明顯增加。
　　5）達(dá)沙替尼在體外能抑制 FAK的磷酸化水平，使 FAK-SRC復(fù)合物的活性顯著減弱，從而明顯抑制鼻咽癌細(xì)胞的遷移能力，且呈濃度依賴(lài)性。
　　結(jié)論：在我們的研究中發(fā)現(xiàn)，達(dá)沙替尼能通過(guò)減少Src激酶磷酸化的水平，使得下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路MAPK和PI3K/AKT的活性受到抑制，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)凋亡。此外，達(dá)沙替尼還能夠抑制 SRC-FAK復(fù)合體的形成，減弱細(xì)胞與細(xì)