山東省H3N2亞型流感病毒的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、[背景]
　　流行性感冒病毒共分為甲、乙、丙、丁型，其中季節(jié)性H3N2亞型流感在人群中普遍流行。HA蛋白和NA蛋白是H3N2流感病毒表面主要的兩種抗原，經(jīng)常頻繁地發(fā)生變異，對(duì)發(fā)生流感感染和造成流行具有重要意義，其中HA蛋白的遺傳變異進(jìn)化發(fā)生得最頻繁。HA蛋白的抗原位點(diǎn)、受體結(jié)合部位及關(guān)鍵的糖基化位點(diǎn)如果發(fā)生氨基酸替換，病毒的致病性和感染的宿主種類就會(huì)相應(yīng)發(fā)生改變。NA蛋白又作為藥物治療的重要靶點(diǎn)，酶活性中心的關(guān)鍵位點(diǎn)發(fā)生變異會(huì)導(dǎo)致

2、耐藥性。因此研究H3N2亞型流感病毒的HA基因和NA基因在流感流行中的基因進(jìn)化規(guī)律和分子變異特點(diǎn)具有重要意義。
　　[目的]
　　了解2014年4月至2015年3月山東省流感病毒病原學(xué)監(jiān)測(cè)的描述性流行病學(xué)分布情況，以及在H3N2亞型流感病毒的流行過(guò)程中HA基因和NA基因的分子流行病學(xué)分布特點(diǎn)，為預(yù)測(cè)流感發(fā)展趨勢(shì)及預(yù)防控制流行提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。
　　[方法]
　　本研究首先對(duì)山東省流感監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行流感病毒病原學(xué)監(jiān)

3、測(cè)情況的基本描述，然后選擇山東省疾病預(yù)防控制中心流感實(shí)驗(yàn)室于2014年4月至2015年3月期間分離保存的H3N2亞型流感毒株102株，并對(duì)其進(jìn)行復(fù)蘇，最后共95株H3N2亞型流感病毒毒株進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增和基因測(cè)序。利用DNAStar軟件的EditSeq模塊編輯序列及MegAlign模塊分析同源性;多序列比對(duì)采用Molecular EvolutionaryGenetics Analysis5.0(MEGA5.0)軟件的ClustalW

4、程序;系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)的構(gòu)建使用MEGA5.0軟件Neighbor-Joining(NJ)法。
　　[結(jié)果]
　　1.山東省于2014年4月至2015年3月共收集了21276份流感樣病例鼻咽拭子標(biāo)本，描述分析發(fā)現(xiàn)2014年10月至2015年3月為流感流行高峰期，感染人群主要為0～15歲人群，以5歲以下比例最高;共分離出2371株流感病毒細(xì)胞株，其中A(H3N2)流感病毒占比例最高（1665株），并且2014年11至2015年1月是

5、H3N2亞型流感的流行高峰期。
　　2.山東省所分離的H3N2亞型流感病毒的HA和NA基因序列的同源性分析結(jié)果分別為98.0～100％和97.7～100％。HA基因系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)分析顯示，大多數(shù)山東省分離的H3N2流感病毒的HA基因聚集成一簇，與A/Switzerland/9715293/2013(H3N2)的親緣關(guān)系最近，與A/Texas/50/2012(H3N2)的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。NA基因系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)分析提示，大多數(shù)山東省分離的H3N

6、2流感病毒NA基因聚集分布在一個(gè)大分支，與A/Switzerland/9715293/2013(H3N2)的遺傳距離最短，與A/Texas/50/2012(H3N2)的遺傳距離最長(zhǎng)，均未發(fā)現(xiàn)明顯的地域和時(shí)間特征。
　　3.HA蛋白共52個(gè)位點(diǎn)發(fā)生氨基酸替換，其中抗原決定簇（HA1蛋白）位點(diǎn)發(fā)生了17個(gè)，裂解位點(diǎn)序列并沒(méi)有發(fā)生變異，丟失糖基化位點(diǎn)NES134-136和NSS156-158，同時(shí)新增糖基化位點(diǎn)NYT170-172。NA

7、蛋白有51個(gè)位點(diǎn)發(fā)生氨基酸替換，酶活性中心位點(diǎn)118(D-N)、371(V-I)發(fā)生變異，催化位點(diǎn)156(V-I)、425(T-N)發(fā)生變異，5個(gè)抗原位點(diǎn)發(fā)生變異，丟失糖基化位點(diǎn)NWS7779和NDS320-322，同時(shí)新增糖基化位點(diǎn)NIT84-86和NAS236-238。
　　[結(jié)論]
　　1.2014年4月至2015年3月山東省流感病毒流行的優(yōu)勢(shì)毒株是H3N2亞型流感病毒，其流行高峰時(shí)間為冬春季（2014年11月、201

8、4年12月、2015年1月）。
　　2.2014年4月至2015年3月山東省分離的H3N2亞型流感流行株的HA基因和NA基因的同源性較高，但與當(dāng)年疫苗株的遺傳距離稍遠(yuǎn)，與下一年的疫苗株遺傳距離較近;HA蛋白和NA蛋白均有部分抗原決定位點(diǎn)出現(xiàn)氨基酸替換現(xiàn)象，HA基因普遍可能發(fā)生了抗原性漂移，WHO推薦的2014～2015年疫苗株對(duì)H3N2亞型流感病毒保護(hù)效果可能較差，而2015～2016年的疫苗株可能對(duì)其具有一定保護(hù)效果。