螺旋藻蛋白酶解產(chǎn)物的制備及其生物學(xué)功能評(píng)價(jià).pdf

1、對(duì)于疾病，人們?cè)絹?lái)越傾向于預(yù)防而不是治療，并逐漸認(rèn)識(shí)到健康和營(yíng)養(yǎng)的關(guān)系，想通過(guò)功能性保健食品抵銷空氣、水和食品中的污染物、致病菌和化學(xué)制品所帶來(lái)的危害，維持和提高健康狀態(tài)。螺旋藻作為迄今為止發(fā)現(xiàn)的營(yíng)養(yǎng)最豐富、最全面的綠色天然食品，并且其富含多種營(yíng)養(yǎng)成份及生物活性物質(zhì)如藻藍(lán)蛋白能產(chǎn)生很多生理效應(yīng)，對(duì)螺旋藻的研究和應(yīng)用也因而受到了越來(lái)越多的關(guān)注。目前世界各地都出現(xiàn)了很多螺旋藻的生產(chǎn)企業(yè)，但是，螺旋藻有不良的藻腥味，制成食品會(huì)嚴(yán)重影響產(chǎn)品的口

2、感和可接受性。生物活性肽作為一種蛋白資源的利用方式，不僅具有營(yíng)養(yǎng)性小肽易消化吸收的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)，還具有抗過(guò)敏性、降低膽固醇、增強(qiáng)免疫力、促進(jìn)腸道菌群平衡等諸多生理功能，開(kāi)發(fā)和研究生物活性肽類食品在國(guó)際保健品行業(yè)中已成為一個(gè)焦點(diǎn)。 本試驗(yàn)分別以超聲波法、反復(fù)凍融法、高壓均質(zhì)法和反復(fù)凍融一超聲波法破碎螺旋藻細(xì)胞提取食品級(jí)螺旋藻胞內(nèi)混合蛋白，采用凱氏定氮法和吸光度法測(cè)定蛋白含量，對(duì)各方法的各種影響因素進(jìn)行了正交優(yōu)化，確定了反復(fù)凍融一超聲波

3、法為本試驗(yàn)中螺旋藻胞內(nèi)蛋白的最適提取方法，其粗蛋白提取率為83.5％，提取條件為底物濃度10％，凍融時(shí)間4小時(shí)，反復(fù)凍融5次，超聲功率1000w，超聲時(shí)間9min，間隔時(shí)間25min。提取的蛋白經(jīng)10000Da超濾去除小分子雜質(zhì)冷凍干燥制成干粉后，分別用堿性蛋白酶水解和模擬胃腸道蛋白酶水解，水解時(shí)研究了各因素對(duì)結(jié)果的影響，得到堿性蛋白酶對(duì)螺旋藻蛋白的最佳水解條件為：pH7.0，酶底物比2.2％，反應(yīng)時(shí)間160min，反應(yīng)溫度50℃，耗堿

4、3.2850mL，水解度與htot之比為120.20％，試驗(yàn)后TCA-NSI為27.73％；而模擬胃腸道蛋白酶水解中胃蛋白酶水解的最適條件為：pH2.0，酶解溫度37℃，加酶量2.0％，底物濃度3％，水解時(shí)間180min；胰酶水解的最適條件為：pH7.0，酶解溫度37℃，加酶量5％，底物濃度3％，水解時(shí)間240min。模擬胃腸道水解后水解度為24.79％，TCA-NSI為34.66％。得到的水解液最后用10000Da超濾去除大分子物質(zhì)，

5、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)并冷凍干燥后制得水解肽粉。然后將所制得的螺旋藻蛋白及其水解肽粉灌胃正常小鼠，取其糞便，采用選擇性培養(yǎng)基TPY培養(yǎng)基、M17培養(yǎng)基、VRBDA培養(yǎng)基、疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基對(duì)腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌、腸球菌和腸道致病菌進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明螺旋藻蛋白及其水解肽對(duì)小鼠腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌增殖有一定的影響作用，同時(shí)還能抑制致病菌、腸桿菌的增殖，對(duì)腸球菌的作用不很明顯。灌胃后整個(gè)腸道的定植抗力即E

6、/B值要顯著增大。而在對(duì)大鼠喂養(yǎng)高脂飼料的同時(shí)，灌胃其螺旋藻蛋白及其水解肽觀察對(duì)血脂水平影響的試驗(yàn)結(jié)果表明在高脂飼料的同時(shí)灌胃螺旋藻粉及其蛋白可極顯著降低高脂大鼠血漿中TC、TG、LDL-C水平，并極顯著提高HDL-C值：而灌胃螺旋藻蛋白的堿性蛋白酶水解肽和模擬腸道水解肽顯著降低高脂大鼠血漿中TC、TG、LDL-C水平，并顯著提高HDL-C值。 本試驗(yàn)采用不同方法提取螺旋藻胞內(nèi)蛋白，用堿性蛋白酶和模擬胃腸道蛋白酶對(duì)螺旋藻胞內(nèi)蛋白