揚(yáng)州地區(qū)屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)以及人源沙門(mén)菌分離株表型和基因型相關(guān)性研究.pdf

1、沙門(mén)菌是重要的人獸共患病原菌，長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)人類(lèi)和動(dòng)物都造成了嚴(yán)重的危害。蛋類(lèi)、禽肉和豬肉一直被認(rèn)為是引起沙門(mén)菌病的三大來(lái)源。而隨著蛋雞中沙門(mén)菌防控項(xiàng)目的大規(guī)模開(kāi)展，蛋類(lèi)和禽肉中沙門(mén)菌的分離率均得到了顯著的降低。因此，豬肉及豬肉制品中沙門(mén)菌的防控已成為當(dāng)今發(fā)達(dá)國(guó)家關(guān)注的一大重點(diǎn)，而作為豬肉生產(chǎn)鏈中兩個(gè)最重要的環(huán)節(jié)，屠宰場(chǎng)的屠宰流程和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)豬肉零售點(diǎn)的衛(wèi)生狀況對(duì)于豬肉中沙門(mén)菌的防控有著深遠(yuǎn)的影響。本研究旨在了解揚(yáng)州市屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)豬肉以及

2、人群中沙門(mén)菌的分布狀況、血清型特點(diǎn)以及耐藥情況，并利用MLST、PFGE、CRISPR等分子亞分型方法對(duì)它們進(jìn)行基因分型研究，以期探明屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)豬肉以及人來(lái)源沙門(mén)菌之間的內(nèi)在聯(lián)系并找出潛在的沙門(mén)菌傳播途徑，從而為食源性沙門(mén)菌的防控提供數(shù)據(jù)支持。
　　一、揚(yáng)州地區(qū)屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)以及人源沙門(mén)菌分離株的分離鑒定及藥物敏感性分析
　　2013年10月至2014年12月，從揚(yáng)州市某屠宰場(chǎng)及其下游農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采集環(huán)境樣品和屠宰豬樣品

3、392份、豬肉樣品178份，分別分離出沙門(mén)菌275株和130株，分離率為70.2％(275/392)和73.0％(130/178)。從揚(yáng)州市和泰州市疾病預(yù)防與控制中心收集人源沙門(mén)菌49株。三種來(lái)源的沙門(mén)菌共計(jì)454株。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，屠宰場(chǎng)5次采樣沙門(mén)菌分離率之間并無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，且沙門(mén)菌的分離情況受季節(jié)因素影響不大。血清型鑒定結(jié)果顯示，屠宰場(chǎng)和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)樣品中的最優(yōu)勢(shì)血清型均為德?tīng)柋吧抽T(mén)菌，而在人源沙門(mén)菌中，德?tīng)柋吧抽T(mén)菌位

4、居第二，其他血清型如鼠傷寒沙門(mén)菌、鴨沙門(mén)菌、倫敦沙門(mén)菌在三種來(lái)源中也較為常見(jiàn)。對(duì)454株三種來(lái)源的沙門(mén)菌進(jìn)行16種抗生素的藥敏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示屠宰場(chǎng)來(lái)源的沙門(mén)菌對(duì)四環(huán)素耐藥率最高，為30.9％;而農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)豬肉來(lái)源的沙門(mén)菌對(duì)萘啶酸表現(xiàn)出最高的耐藥性，達(dá)到了33.1％;人源沙門(mén)菌對(duì)氨芐西林抗性最大，為55.1％。同時(shí)，在β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素中，三種來(lái)源的沙門(mén)菌對(duì)青霉素類(lèi)的耐藥性顯著高于頭孢菌素類(lèi)(P＜0.05);而在喹諾酮類(lèi)抗生素中，對(duì)萘啶酸的

5、耐藥性也顯著高于恩諾沙星、氧氟沙星等其他類(lèi)抗生素（P＜0.05）。此外，三種來(lái)源的沙門(mén)菌對(duì)鏈霉素、復(fù)方新諾明等也表現(xiàn)出較高的耐藥率。鼠傷寒沙門(mén)菌、倫敦沙門(mén)菌和德?tīng)柋吧抽T(mén)菌均表現(xiàn)出較高的耐藥性，其中鼠傷寒沙門(mén)菌多重耐藥最為突出。值得注意的是，1株人源印第安納沙門(mén)菌對(duì)本研究所用的16種抗生素均呈現(xiàn)耐藥。三種來(lái)源沙門(mén)菌最常見(jiàn)的耐藥型均為NAL，一定程度上說(shuō)明了耐藥沙門(mén)菌在屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)豬肉以及人三者之間的傳播。
　　二、揚(yáng)州地區(qū)屠宰場(chǎng)

6、、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)以及人源沙門(mén)菌分離株的分子分型及相關(guān)性分析
　　利用多位點(diǎn)序列分型方法(MLST)將屠宰場(chǎng)（275株）、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)（130株）以及人群（49株）來(lái)源的沙門(mén)菌分離株分成了17、13和12種ST型，其中ST40均為主要ST型。屠宰場(chǎng)不同環(huán)節(jié)大量相同ST型的重復(fù)出現(xiàn)，說(shuō)明了屠宰場(chǎng)中沙門(mén)菌沿屠宰線的傳播。脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)將50株德?tīng)柋吧抽T(mén)菌和27株鼠傷寒沙門(mén)菌分成了46和17種PFGE型。屠宰場(chǎng)第一次采樣過(guò)程中，胴體修飾

7、環(huán)節(jié)、開(kāi)膛環(huán)節(jié)以及保定環(huán)節(jié)分離的鼠傷寒沙門(mén)菌P2-D13、P2-E13和P2-S1，它們之間的相似性均為100％，說(shuō)明這3株沙門(mén)菌可能為同一個(gè)克隆，顯示沙門(mén)菌能夠在屠宰場(chǎng)中沿屠宰線發(fā)生水平傳播。分別來(lái)自于屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)以及人的鼠傷寒沙門(mén)菌P4-L1、N2-J3和YZJK2-17，PFGE相似性超過(guò)90％，說(shuō)明沙門(mén)菌可能通過(guò)豬肉這一媒介完成了在豬肉生產(chǎn)消費(fèi)鏈中的傳播。利用規(guī)律成簇間隔的短回文重復(fù)序列(CRISPR)分型方法可將27株來(lái)自