駱駝蓬氨基酸成分累積規(guī)律及其對(duì)鴨嘴花堿急性毒性和藥動(dòng)學(xué)的影響.pdf

1、目的:建立新疆駱駝蓬藥材中游離氨基酸的含量測(cè)定方法及分離提取工藝，測(cè)定不同藥用部位、不同采集時(shí)間的駱駝蓬各游離氨基酸的含量，研究駱駝蓬不同部位氨基酸在不同采摘季節(jié)的經(jīng)時(shí)量變規(guī)律與總生物堿月積累動(dòng)態(tài)變化之間的相關(guān)性，為研究駱駝蓬生物堿的生物合成機(jī)理、揭示其在植物中形成轉(zhuǎn)化的實(shí)質(zhì)奠定基礎(chǔ)，并對(duì)今后生物堿的結(jié)構(gòu)改造、仿生合成提供依據(jù)。在此基礎(chǔ)上通過(guò)對(duì)比鴨嘴花堿的急性毒性及駱駝蓬草中氨基酸類成分對(duì)鴨嘴花堿急性毒性的影響，考察駱駝蓬草中氨基酸類成

2、分對(duì)鴨嘴花堿主要藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)的影響，為駱駝蓬藥材氨基酸及生物堿成分的合理利用奠定一定基礎(chǔ)。
　　方法:
　?、偈占煌幱貌课弧⒉煌杉瘯r(shí)間的駱駝蓬，建立駱駝蓬游離氨基酸分離測(cè)定的方法，并進(jìn)行方法學(xué)考察。
　?、谝杂坞x氨基酸的含量之和為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)、正交實(shí)驗(yàn)分別篩選回流提取法和超聲提取法提取駱駝蓬藥材游離氨基酸的工藝參數(shù)，并對(duì)兩種方法的優(yōu)選工藝進(jìn)行比較，確定提取工藝。
　　③測(cè)定不同采集時(shí)間、不同藥用部位的

3、駱駝蓬游離氨基酸含量，研究駱駝蓬地上部分游離氨基酸的經(jīng)時(shí)量變規(guī)律與總生物堿月積累動(dòng)態(tài)變化之間的相關(guān)性。
　?、懿捎肂liss法分別測(cè)定鴨嘴花堿及駱駝蓬草中氨基酸類成分干預(yù)的鴨嘴花堿的LD50，考察駱駝蓬草中氨基酸類成分對(duì)鴨嘴花堿急性毒性的影響。
　?、荽笫蠊辔给喿旎▔A(45mg/kg)測(cè)定不同時(shí)間血漿樣本中鴨嘴花堿的濃度，并與混合氨基酸干預(yù)給藥1周后大鼠血藥濃度比較，采用PK Solution2.0數(shù)據(jù)處理軟件以統(tǒng)計(jì)矩法計(jì)算

4、藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，初步考察駱駝蓬草中氨基酸類成分對(duì)鴨嘴花堿體內(nèi)過(guò)程的影響。
　　結(jié)果:
　?、俨捎酶咝б合嗌V法建立了駱駝蓬不同部位12種游離氨基酸的含量測(cè)定方法。色譜條件為:日本島津VP-ODS色譜柱(4.6×250mm，5μm);以0.10mol/L乙酸銨溶液(pH6.5)-乙腈為流動(dòng)相梯度洗脫，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，柱溫40℃。12種氨基酸分別在其線性范圍內(nèi)且線性關(guān)系良好，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、衍生化

5、重復(fù)性均良好，RSD均小于2.0％，平均回收率在98％～102％。
　?、诎被崽崛」に囇芯拷Y(jié)果表明，回流提取法更適合駱駝蓬藥材游離氨基酸的提取。優(yōu)選的回流提取工藝條件為:提取溫度為70℃，50倍量，乙醇濃度為60％條件下提取1.5h。
　?、蹨y(cè)定不同采集時(shí)間及駱駝蓬不同部位（地上部分、根、種子）的游離氨基酸的含量，繪制出含量變化趨勢(shì)圖，并進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明:駱駝蓬地上部分中主要含有脯氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、絲氨酸、甘

6、氨酸、甲硫氨酸等氨基酸;根中主要含有賴氨酸、脯氨酸、絲氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等氨基酸;種子中主要含有賴氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、甘氨酸、脯氨酸等氨基酸。駱駝蓬不同部位游離氨基酸的總含量高低順序依次為:種子、根、地上部分。駱駝蓬藥材不同部位游離氨基酸總含量以7月份為最高，然后逐漸下降。不同采集時(shí)間的駱駝蓬地上部分的氨基酸中，脯氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、亮氨酸的含量均從5月份逐漸升高，在6月份達(dá)到最高，7月后逐漸降低，9～11月小幅波動(dòng);甲硫氨

7、酸含量從5月份逐漸升高，在9月份達(dá)到最高，在10月略微降低，在11月小幅升高;絲氨酸、色氨酸隨著月份的變化含量逐漸降低，在5～6月下降較快，7月份略有回升，11月降到最低;甘氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、丙氨酸隨著月份的變化含量逐漸降低。氨基酸含量累積規(guī)律和相關(guān)性分析結(jié)果表明:苯丙氨酸可能在駱駝蓬植物中參與苯丙烷類化合物代謝途徑，并通過(guò)多次酶促反應(yīng)生成脫乙酰駱駝蓬苷、駱駝蓬苷等黃酮類化合物;絲氨酸、色氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、

8、丙氨酸和賴氨酸可能參與了植物生成駱駝蓬堿的次生代謝過(guò)程;絲氨酸、色氨酸、甘氨酸、纈氨酸、精氨酸和脯氨酸可能參與了植物生成去氫駱駝蓬堿的次生代謝過(guò)程。精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸等也可能通過(guò)駱駝蓬中的微生物代謝而生成鴨嘴花堿。
　?、茗喿旎▔A的LD50為308.25mg/kg，95％可信區(qū)間為268.13～354.36mg/kg;駱駝蓬草中氨基酸類成分干預(yù)后鴨嘴花堿的LD50為376.94mg/kg，95％可信區(qū)間為330.0

9、4～430.52mg/kg，經(jīng)LSD檢驗(yàn)和對(duì)數(shù)結(jié)果的t檢驗(yàn)，表明兩者之間有顯著性差異，駱駝蓬草氨基酸類成分對(duì)鴨嘴花堿確實(shí)具有一定的減毒的作用。
　　⑤大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果表明，鴨嘴花堿和氨基酸類成分干預(yù)后的鴨嘴花堿的Cmax分別為2897.86和2216.85ng/mL，t1/2Ke分別為146.98和114.60min、MRT分別為271.27和177.38 min，AUC(0-t)分別為701.90和508.74μg·min