駱駝蓬脂肪酸經時變化規(guī)律及駱駝蓬脂溶性提取物生物活性的初步研究.pdf

1、目的:駱駝蓬是蒺藜科駱駝蓬(Peganum harmalaL.)的全草及種子，是我國維吾爾族、哈薩克族和蒙古族等民族沿用已久的民族藥物。駱駝蓬中脂肪酸為其生物堿、黃酮等化合物的合成提供能量，與植物代謝息息相關。經研究駱駝蓬種子脂溶性提取物中脂肪族化合物占絕對優(yōu)勢，而目前針對新疆駱駝蓬脂肪酸的研究報道極少。本文在建立了駱駝蓬脂肪酸含量測定方法及其指紋圖譜的基礎上初步探討駱駝蓬植物體內脂肪酸的經時變化規(guī)律，并對駱駝蓬脂溶性提取物的生物活性進

2、行初步研究，為進一步認識和合理開發(fā)利用駱駝蓬植物資源提供試驗依據與參考。方法:①以出油率為指標，采用均勻設計法分別優(yōu)化了索氏提取法和超聲-微波協(xié)同萃取法提取駱駝蓬籽脂溶物的工藝參數，并對兩種方法的優(yōu)選工藝進行橫向比較，確定合適的提取方法與工藝參數。②以5種脂肪酸（油酸、亞油酸、亞麻酸、棕櫚酸、花生酸）的總含量、甲酯化峰個數及百分峰面積的綜合評分為優(yōu)選指標，采用正交試驗分別對4種甲酯化過程（KOH-甲醇法、BF3-甲醇法、NaOH-甲醇法

3、及1％H2SO4-甲醇回流法）進行條件優(yōu)選，并通過橫向比較確定合適的脂肪酸甲酯化條件。③采用優(yōu)選的甲酯化條件，進行氣質分析，得出駱駝蓬地上部分、種子及根中脂肪酸的種類及相對百分含量。④初步建立5種駱駝蓬脂肪酸的含量測定方法并測定其不同采摘季節(jié)、不同部位的脂肪酸含量。⑤初步建立駱駝蓬地上部分脂溶性提取物GC指紋圖譜。⑥對駱駝蓬不同部位（地上部分、種子及根）水提物、不同月份水提物、駱駝蓬總堿及脂溶性提取物進行急性毒性試驗，測得其對小鼠的半數

4、致死量(LD50)。⑦對脂溶性提取物抗炎及鎮(zhèn)痛的藥效學進行初步研究。結果:①索氏提取法比較適合駱駝蓬籽脂溶物的提取，優(yōu)選工藝條件為:以石油醚為提取溶劑，溶劑倍數為20倍，于80℃的水浴回流11小時，出油率為30.1％。②通過對4種甲酯化方法(KOH-甲醇法、BF3-甲醇法、NaOH-甲醇法及1％H2 SO4-甲醇回流法)的優(yōu)選試驗結果進行橫向比較，結果表明1％H2SO4-甲醇回流法更適合用于駝蓬籽中脂肪酸的甲酯化，其優(yōu)選條件為:醇油比4

5、∶1，催化劑用量2∶1，反應溫度為80℃，回流時間為30min，棕櫚酸甲酯化率為98.1％，油酸甲酯化率為97.5％，亞油酸甲酯化率為98.0％，亞麻酸甲酯化率為98.5％。四種脂肪酸甲酯化率均大于97％。③采用優(yōu)選的甲酯化條件，運用氣質聯(lián)用分析，用面積歸一化法計算出各組分的相對百分含量，經CAS數據庫檢索，確定了駱駝蓬地上部分及根中脂肪酸的種類，并與課題組前期獲得的駱駝蓬種子中脂肪酸的種類進行對比。地上部分共分離鑒定了18種化學成分，

6、其中有14種脂肪酸，主要成分為亞油酸(31.3％)、油酸(18.2％)、棕櫚酸(9.8％)、硬脂酸(4.2％)。根分離鑒定了19種化學成分，其中有16種脂肪酸，主要成分為木蠟酸(23.3％)、山崳酸(18.8％)、亞油酸(12.5％)、油酸(11.2％)、棕櫚酸(6.5％)、二十六碳酸(5.1％)。④用于測定駱駝蓬中脂肪酸含量的測定方法符合方法學要求，不同批次、不同季節(jié)采摘的駱駝蓬的不同部位（地上部分、種子及根）的脂肪酸的含量存在差異，

7、主要體現(xiàn)在:地上部分和種子中脂肪酸的種類基本相似，以亞油酸、油酸等不飽和脂肪酸為主;駱駝蓬根中以木蠟酸、山崳酸等飽和脂肪酸為主。⑤建立了不同采收時間（5-8月份）駱駝蓬地上部分氣相指紋圖譜，有13個共有峰，共有峰占總峰面積的95％以上。⑥駱駝蓬不同提取物的急性毒性試驗結果為:駱駝蓬根水提取物的LD50為4439mg/kg，95％可信區(qū)間為2800～5000mg/kg，駱駝蓬種子水提取物的LD50為4439mg/kg，95％可信區(qū)間為28

8、00～5000mg/kg，試驗觀察表明駱駝蓬根水提取物的毒性反應更為明顯。駱駝蓬地上部分不同月份水溶性提取物對小鼠的急性毒性試驗結果(LD50)為:五月份的LD50為9963.4mg/kg（95％可信區(qū)間為9003.5～10637mg/kg）、六月份的LD50為10262mg/kg（95％可信區(qū)間為7809.7～11182mg/kg）、七月份的LD50為10427mg/kg(95％可信區(qū)間為9357.6～11554mg/kg)、八月份的

9、LD50為12031mg/kg（95％可信區(qū)間為9357.6～11554mg/kg）。駱駝蓬脂溶性提取物與駱駝蓬總生物堿提取物急性毒性試驗結果為:駱駝蓬脂溶性提取物的LD50為7618.2mg/kg（95％可信區(qū)間為5839.9～10303mg/kg），駱駝蓬生物堿提取物的LD50為672.84mg/kg（95％可信區(qū)間為529.9～882.16mg/kg）。⑦脂溶物的高、中劑量組和總堿的高劑量組均能降低不同時間點小鼠的足跖腫脹，與空白

10、對照相比具有顯著性差異(P＜0.05)。小鼠扭體試驗結果表明:與模型組相比，總堿和脂溶物的高、中劑量組對小鼠扭體次數的減少具有顯著性差異(P＜0.05);與陽性藥相比，只有總堿的高劑量組對小鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛作用(P＜0.05)。結論:①優(yōu)選出的索氏提油工藝穩(wěn)定、合理、可行，可用于試驗室提取駱駝蓬籽的脂溶性物質。②優(yōu)選出的甲酯化工藝穩(wěn)定、反應時間短，為建立測定駱駝蓬籽中脂肪酸含量的氣相色譜法奠定了基礎。③駱駝蓬植物中脂肪酸的含量及種類的分