厄貝沙坦和辛伐他汀對(duì)大鼠體內(nèi)吉非替尼藥代動(dòng)力學(xué)影響的研究.pdf

1、目的：酪氨酸激酶由于在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，并且與腫瘤的生長(zhǎng)、增殖、轉(zhuǎn)移緊密聯(lián)系，近年來(lái)作為腫瘤治療的一個(gè)非常重要的藥物靶點(diǎn)被廣泛研究。酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitors，TKIs)是以受體酪氨酸激酶為靶點(diǎn)的藥物，具有選擇性較高、療效較好、不良反應(yīng)比較少等特點(diǎn)，尤其是對(duì)基因突變的敏感性患者，TKIs治療顯示了很好的臨床療效。TKIs之一吉非替尼，主要適用于治療以往接受過(guò)化學(xué)治療，轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌(non

2、-small cell lung cancer，NSCLC)的患者，或者不適于化療的局部晚期腫瘤的患者。這些腫瘤患者中有些同時(shí)患有高血壓，高血脂等疾病，服用厄貝沙坦或辛伐他汀等降血壓，降血脂的藥物。厄貝沙坦和辛伐他汀可能會(huì)與吉非替尼在體內(nèi)發(fā)生相互作用，產(chǎn)生藥代動(dòng)力學(xué)的影響。因此，本試驗(yàn)將建立快速、高效、準(zhǔn)確的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(Liquid chromatography tandem mass spectrometry，LC-MS/MS

3、)測(cè)定酪氨酸酶抑制劑吉非替尼血藥濃度，并通過(guò)藥代動(dòng)力學(xué)方法評(píng)價(jià)厄貝沙坦和辛伐他汀對(duì)吉非替尼體內(nèi)代謝的影響，旨在為臨床合理用藥提供參考。
　　方法：
　　1.LC-MS/MS法測(cè)定吉非替尼血漿藥物濃度
　　1.1.色譜與質(zhì)譜條件
　　色譜柱：Gemini C18(50×2.0 mm，5μm)；柱溫：40℃；自動(dòng)進(jìn)樣器溫度：4℃；流動(dòng)相：0.05％NH3·H20(A)-乙腈(B)；流速：0.5ml·min-1；梯度洗

4、脫條件：0.01-1 min，5%B；1-1.5 min，5%-95%B；1.5-2.5 min，95%B；2.5-3 min，95%-5%B；4 min，5%B。離子源：ESI；離子監(jiān)測(cè)方式：MRM；離子極性：正離子；CUR：25 kPa；CAD：8 kPa；離子源噴霧電壓：5500 v；離子源溫度：500℃；EP：10 V；CXP：6 V；GS1：50 kPa；GS2：50 kPa；吉非替尼離子對(duì)：446.9/128.0 m/z，C

5、E：30 V，DP：80 V；內(nèi)標(biāo)厄洛替尼離子對(duì)：394.2/277.9 m/z，CE：37 V，DP：113 V。
　　1.2.血漿樣品的處理
　　精密取空白血漿90μl，加不同稀釋濃度吉非替尼標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，加內(nèi)標(biāo)厄洛替尼(1μg/ml)10μL，渦旋20 s，加乙腈500μL，渦旋3 min，離心(15000 g·min-1)5 min，精密取上清50μL加入450μL水，渦旋1min，離心(15000 g·min-

6、1)3 min，進(jìn)樣，建立吉非替尼血藥濃度測(cè)定方法。
　　2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥
　　SD大鼠30只，按體重隨機(jī)分為3組，對(duì)照組(吉非替尼單藥組)、實(shí)驗(yàn)組 A(吉非替尼+厄貝沙坦組)、實(shí)驗(yàn)組 B(吉非替尼+辛伐他汀組)，給藥劑量吉非替尼片為50 mg/kg，厄貝沙坦片為15 mg/kg，辛伐他汀片為2 mg/kg，在給藥后在0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、48、72 h時(shí)間點(diǎn)于大鼠眼內(nèi)眥取血。
　

7、　3.比較厄貝沙坦和辛伐他汀分別對(duì)吉非替尼藥代動(dòng)力學(xué)的影響
　　用DAS3.0軟件處理吉非替尼血藥濃度，得到給藥后大鼠非房室模型的藥代參數(shù)，用SPSS20.0軟件處理非房室模型的藥代參數(shù)，并比較厄貝沙坦和辛伐他汀分別對(duì)吉非替尼藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.LC-MS/MS法測(cè)定吉非替尼血漿藥物濃度
　　方法學(xué)結(jié)果顯示所選方法專屬性高,血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=0.00543X+0

8、.00548，r=0.9943，最低定量限為5 ng/ml，最低定量限精密度的RSD%小于20%，質(zhì)控樣品的日內(nèi)精密度和日間精密度RSD均小于15%，最低定量限和質(zhì)控樣品的準(zhǔn)確度均在85-115%范圍內(nèi)，室溫4h、血漿處理后自動(dòng)進(jìn)樣器12 h、反復(fù)凍融三次、低溫冰箱-70℃長(zhǎng)期放置、稀釋10倍，20倍穩(wěn)定性的準(zhǔn)確度均在85-115%范圍內(nèi)，基質(zhì)效應(yīng)、樣品回收率均符合《中國(guó)藥典》生物樣本分析指導(dǎo)原則的要求。
　　2.采用DAS3.0

9、軟件處理吉非替尼血藥濃度，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評(píng)價(jià)厄貝沙坦和辛伐他汀對(duì)吉非替尼藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　實(shí)驗(yàn)組A：(吉非替尼+厄貝沙坦)給藥組的非房室模型參數(shù)AUC(0-t)、AUC(0-∞)、Cmax、tmax、t1/2、Vd、CL、MRT(0-t)、MRT(0-∞)、C_last與對(duì)照組(吉非替尼單藥組)比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　實(shí)驗(yàn)組B：(吉非替尼+辛伐他汀)給藥組的非房室模型參數(shù)AUC(0-t)、AUC(0-∞)、C max

10、、tmax、t1/2、MRT(0-t)、MRT(0-∞)、C_last、tmax、MRT(0-t)與對(duì)照組(吉非替尼單藥組)比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而Vd和CL與對(duì)照組(吉非替尼單藥組)比較具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)建立的LC-MS/MS法測(cè)定吉非替尼血藥濃度的方法，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，方法學(xué)考察結(jié)果均符合生物樣品分析的質(zhì)量控制要求。
　　2.本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較聯(lián)用厄貝沙坦組和辛