電致化學發(fā)光信號放大體系的構(gòu)建及其高靈敏免疫分析方法.pdf

1、本文就環(huán)糊精類物質(zhì)對電化學發(fā)光物三聯(lián)吡啶釕及其通過靜電及微孔吸附作用與SiO2納米粒形成的納米復合物的電化學發(fā)光的增強作用、三聯(lián)吡啶釕摻雜SiO2納米粒的制備及在其表面包裹上Nafion與陰離子聚電解質(zhì)的混合膜而得到新的電化學發(fā)光納米復合物的制備與性能、Nafion與陰離子聚電解質(zhì)混合膜包裹三聯(lián)吡啶釕摻雜SiO2納米復合物在乙肝表面抗原(HBsAg)檢測中的應用做了相關研究。同時,根據(jù)本文的檢測要求設計并制做了新的檢測器件,并對其性能做

2、了相關考察。
　　首先,根據(jù)磁分離電化學發(fā)光免疫分析(ECLIA)測定的特殊要求設計并制做了能夠在實驗室電化學發(fā)光檢測儀器上進行ECLIA測定的檢測器件I和II,對兩者檢測性能的研究發(fā)現(xiàn)檢測器件II更適合磁分離ECLIA的檢測要求。通過對三聯(lián)吡啶釕(Ru(bpy)32+)及商品化試劑的檢測證明檢測器件II的電化學及電化學發(fā)光(ECL)檢測性能較好,因而選其作為本課題研究所需要的檢測器件進行后續(xù)的實驗。
　　將環(huán)糊精類物質(zhì)β-

3、環(huán)糊精(β-CD)及羧甲基β-環(huán)糊精(CM-β-CD)加入到Ru(bpy)32+的ECL檢測中發(fā)現(xiàn)其發(fā)光增強,且CM-β-CD的增強作用強于β-CD。分別將β-CD及CM-β-CD與Ru(bpy)32+形成超分子包合物通過靜電及微孔吸附作用與SiO2納米粒形成納米復合物后,其ECL增強,而β-CD的增強效果強于CM-β-CD。采用透射電子顯微鏡(TEM)、Zeta電位儀對SiO2納米粒的形態(tài)及性能進行了表征。采用電化學發(fā)光檢測儀,電化學

4、檢測儀及Zeta電位儀對納米復合物的性能進行了表征。
　　采用St?ber法制備了Ru(bpy)32+摻雜SiO2納米粒Ru@SiO2,其ECL良好。由于Nafion具有較強的成膜性能,將其與陰離子聚電解質(zhì)聚丙烯酸鈉(PAA-Na)混合成膜包裹于Ru@SiO2表面,形成了新的電化學發(fā)光納米復合物。通過電化學檢測,ECL檢測及Zeta電位的檢測對其性能進行了表征,結(jié)果表明Nafion與PAA-Na混合膜包裹的Ru@SiO2納米復合物

5、的ECL明顯強于純Nafion包裹的Ru@SiO2納米復合物。在此基礎上,將二抗通過與Nafion的疏水性結(jié)構(gòu)連接于混合膜包裹的Ru@SiO2納米復合物上再進一步將Ru(bpy)32+通過離子交換及靜電吸附作用固定在此納米復合物的表面,即進一步的增強了整個納米復合物的ECL。此納米復合物可作為檢測探針進行免疫分析。
　　利用前文制備的Nafion與PAA-Na混合膜包裹Ru(bpy)32+摻雜SiO2納米復合物連接上二抗并進一步吸