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文檔簡介
1、肝素等硫酸多糖是一類重要的生物分子,它通過與蛋白質(zhì)相互作用在許多生物學(xué)過程中起著重要作用,如信號傳導(dǎo)、細胞生長與分化等。研究此類相互作用對深入理解生物和生理過程有重要意義,并對以糖為基礎(chǔ)的新藥研發(fā)有促進作用。本文以毛細管電泳(CE)為主要技術(shù)平臺,結(jié)合高效液相色譜(HPLC)、質(zhì)譜(MS)和流式細胞術(shù)等系統(tǒng)研究了肝素等硫酸多糖與粒細胞集落刺激因子(G-CSF)等蛋白質(zhì)的相互作用。 利用毛細管區(qū)帶電泳(CZE)研究了不同類型蛋白質(zhì)
2、與肝素的相互作用。發(fā)現(xiàn)CZE既可研究動力學(xué)上慢速解離平衡體系,又可研究快速解離平衡體系,擴展了CZE的應(yīng)用范圍。發(fā)現(xiàn)粒細胞巨嗜細胞集落刺激因子與肝素的相互作用具有特異性,并首次測定了結(jié)合常數(shù)。 利用CZE系統(tǒng)研究了不同分子量、不同來源及不同硫酸化位點的肝素和G-CSF的相互作用,進行了定性和定量測定。首次發(fā)現(xiàn)G-CSF能和肝素結(jié)合,且結(jié)合的強弱與肝素的鏈長、來源及硫酸化位點有關(guān)。發(fā)展了一種既適于分離肝素寡糖、又適于研究肝素與蛋白
3、質(zhì)相互作用的方法。首次在肝素寡糖分離基礎(chǔ)上研究其與蛋白質(zhì)的相互作用,并找到了與G-CSF結(jié)合的組分。該方法勿須加入任何添加劑,即可在正向分離模式下使一種肝素酶降解肝素所得寡糖快速達到基線分離。對該寡糖進行了定性研究,未發(fā)現(xiàn)三硫酸化二糖,表明所用肝素酶可選擇性的降解肝素。用HPLC和MS對該寡糖進行進一步分離和鑒定,得出了各肝素二糖的分子量,與CE所得結(jié)果一致。 作為肝素的擴充,研究了其它硫酸聚糖和G-CSF的相互作用,并對硫酸聚
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