活性三肽法氏囊素的液相合成研究.pdf

1、法氏囊素(bursin，BS)是從禽類的法氏囊(bursa.of fabricius，BF)中最先發(fā)現(xiàn)的一種活性三肽，化學(xué)構(gòu)成為L(zhǎng)-Lys-His-Gly-NH<,2>，又稱囊素三肽。研究表明，BS不僅能有效促進(jìn)禽類B淋巴細(xì)胞前體的分化和增殖，而且對(duì)哺乳動(dòng)物及人類淋巴細(xì)胞也具有明顯的免疫活性和生理學(xué)活性。此外，BS可在短時(shí)間內(nèi)促進(jìn)動(dòng)物增重，高濃度的BS能導(dǎo)致雜交瘤細(xì)胞凋亡，因此，它是一種高效的免疫增強(qiáng)劑，有望同胸腺素、干擾素一樣應(yīng)用于臨

2、床，以提高機(jī)體免疫力，治療免疫缺陷癥及癌癥。本論文對(duì)多肽的合成方法和法氏囊素的生物活性進(jìn)行了綜述，研究了法氏囊素的液相合成方法和工藝。 以保護(hù)性氨基酸Boc-Lys-(Boc)-OH-DCHA，F(xiàn)moc-His-(Trt)-OH、Gly-NH<,2>·HCl為原料，二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)為縮合劑，采用碳二亞胺法(DCC法)，從C端向N端依次接肽，TLC跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，經(jīng)過四步合成了活性三肽法氏囊素BS。反應(yīng)總產(chǎn)率為62.7％，

3、BS的純度大于90％。 通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，建立了合成BS的適宜工藝：在Fmoc-His-(Trt)-Gly-NH<,2>的合成反應(yīng)中，首先將原料Fmoc-His-(Trt)-OH、Gly-NH<,2>-HCl在50％(V/V)四氫呋喃(THF)的水溶液預(yù)混合30 min，然后在0℃一次性加入DCC。投料比為Fmoc-His-(Trt)-OH：DCC：Gly-NH<,2>.HCl=1：6：15時(shí)，反應(yīng)最理想，產(chǎn)率為95％；Fmoc保護(hù)

4、基的脫除采用.50％(V/V)二乙胺的二氯甲烷溶液為脫保護(hù)試劑，室溫反應(yīng)8小時(shí)以上，脫除徹底，且后處理簡(jiǎn)單；對(duì)于Boc-Lys-(Boc)-His-(Trt)-Gly-NH<,2>的合成反應(yīng)，選擇0℃和投料比為L(zhǎng)-His一(Trt)一Gly-NH<,2>：Boc-Lys-(Boc)-OH：DCC=1：2：2時(shí)，產(chǎn)率可達(dá)90％；選擇50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液室溫反應(yīng)30 min，可一步脫除Boc基和Tn基。 重點(diǎn)考察了DCC縮合

5、反應(yīng)中的影響因素。反應(yīng)溶劑最終選擇低沸點(diǎn)、可與水混合的四氫呋喃作為基本溶劑。羧基在活化之前，與氨基組分預(yù)混合30 min以形成離子鍵，可以阻止副反應(yīng)的發(fā)生，而氨基的游離與否對(duì)反應(yīng)并無明顯影響。Fmoc-His-(Trt)-Gly-NH2的合成反應(yīng)投料比為Fmoc-His-(Trt).OH：DCC：Gly-NH<,2>·HCl=1：6：15時(shí)，F(xiàn)moc-His-(Trt)-OH底物利用率高，副反應(yīng)發(fā)生少。Boc-Lys-(Boc)-His

6、-(Trt)-Gly-NH<,2>的合成反應(yīng)投料比為L(zhǎng)-His-(Tn)-Gly-NH<,2>：Boc-Lys-(Boc)-OH：DCC：1：2：2時(shí)，產(chǎn)率可達(dá)90％。其反應(yīng)最佳條件均為：溫度0℃，時(shí)間6-8 h，靜置過夜。經(jīng)過多次選擇，用50％(V/V)二乙胺的二氯甲烷溶液脫除Fmoc基8 h以上，50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液室溫脫除Boc基、Tn基30 min可以獲得理想的效果?？s合反應(yīng)后處理采取酸洗，堿洗除去底物，乙酸乙酯沉淀，除