植物硫肽素活性中心液相合成及抑制生菜衰老活性研究.pdf

1、作為一種植物多肽激素，PSK對植物的生長增殖起重要的調節(jié)作用。其核心結構[H-Tyr(SO3H)-Ile-Tyr(SO3H)-OH]具有20％的PSK生物活性。由于PSK在植物體內含量低，提取純化困難，固相合成產物的產率低，本實驗采用經典的液相方法合成其核心結構。所有的反應過程使用薄層色譜監(jiān)控反應進程。為了得到高產率的產物，對反應條件進行優(yōu)化，并使用紅外光譜和液相色譜對結構和純度進行鑒定。另外研究了PSK活性中心對生菜葉片衰老的抑制作用

2、。主要結果如下：
　　 Tyr和Ile的氨基Fmoc保護在冰浴反應后，室溫分別反應5h和4h達到最高產率，液相色譜檢測純度分別為90.5%和97.6%。酪氨酸的羧基叔丁基保護反應通過實驗室自制異丁烯氣體進行保護，按照最優(yōu)反應原料比例室溫反應4d產率達到65.7%，液相色譜分析純度達到92.1%。
　　 二肽和三肽分別在25℃活化后60min和80min，利用TBTU/HOBt/DIEA為縮合試劑，室溫下反應6h和8h達到

3、最高產率，后處理時溶劑析出比分別選擇V乙酸乙酯：V石油醚(60-90℃)=1∶5和1∶6，液相色譜純度達到91.2%和85.4%。
　　 Fmoc保護基團的脫除利用甲醇/NaOH法，25℃攪拌反應45min達到最高產率43.2%，純度為80.4%。三肽tBu保護基25℃攪拌反應5h產率達到82.2%，液相色譜純度為94.9%。
　　 原料比影響硫酸酯化修飾反應產物產率。Fmoc-Tyr-OH∶DMF-SO3(W/W)=1

4、∶15,30℃攪拌反應18h，F(xiàn)moc-Tyr(SO3Na)-OH產率純化前最高為75.4%，純度達到76.9%；Fmoc-Tyr-Ile-Tyr-OH∶DMF-SO3(W/W)=1∶25，25℃反應30h產率最高為63.2%，純度達到92.3%。
　　 生菜葉片衰老過程中，PSK活性中心在一定程度上能降低細胞內H2O2含量，抑制CAT保護酶活性的降低；減緩離體葉片中葉綠素和蛋白質的降解速率，降低MDA的生成量，保護細胞膜結構被