植物硫肽素活性中心液相合成及抑制生菜衰老活性研究.pdf

1、作為一種植物多肽激素，PSK對(duì)植物的生長(zhǎng)增殖起重要的調(diào)節(jié)作用。其核心結(jié)構(gòu)[H-Tyr(SO3H)-Ile-Tyr(SO3H)-OH]具有20％的PSK生物活性。由于PSK在植物體內(nèi)含量低，提取純化困難，固相合成產(chǎn)物的產(chǎn)率低，本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)典的液相方法合成其核心結(jié)構(gòu)。所有的反應(yīng)過(guò)程使用薄層色譜監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程。為了得到高產(chǎn)率的產(chǎn)物，對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，并使用紅外光譜和液相色譜對(duì)結(jié)構(gòu)和純度進(jìn)行鑒定。另外研究了PSK活性中心對(duì)生菜葉片衰老的抑制作用

2、。主要結(jié)果如下：
　　 Tyr和Ile的氨基Fmoc保護(hù)在冰浴反應(yīng)后，室溫分別反應(yīng)5h和4h達(dá)到最高產(chǎn)率，液相色譜檢測(cè)純度分別為90.5%和97.6%。酪氨酸的羧基叔丁基保護(hù)反應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)室自制異丁烯氣體進(jìn)行保護(hù)，按照最優(yōu)反應(yīng)原料比例室溫反應(yīng)4d產(chǎn)率達(dá)到65.7%，液相色譜分析純度達(dá)到92.1%。
　　 二肽和三肽分別在25℃活化后60min和80min，利用TBTU/HOBt/DIEA為縮合試劑，室溫下反應(yīng)6h和8h達(dá)到

3、最高產(chǎn)率，后處理時(shí)溶劑析出比分別選擇V乙酸乙酯：V石油醚(60-90℃)=1∶5和1∶6，液相色譜純度達(dá)到91.2%和85.4%。
　　 Fmoc保護(hù)基團(tuán)的脫除利用甲醇/NaOH法，25℃攪拌反應(yīng)45min達(dá)到最高產(chǎn)率43.2%，純度為80.4%。三肽tBu保護(hù)基25℃攪拌反應(yīng)5h產(chǎn)率達(dá)到82.2%，液相色譜純度為94.9%。
　　 原料比影響硫酸酯化修飾反應(yīng)產(chǎn)物產(chǎn)率。Fmoc-Tyr-OH∶DMF-SO3(W/W)=1

4、∶15,30℃攪拌反應(yīng)18h，F(xiàn)moc-Tyr(SO3Na)-OH產(chǎn)率純化前最高為75.4%，純度達(dá)到76.9%；Fmoc-Tyr-Ile-Tyr-OH∶DMF-SO3(W/W)=1∶25，25℃反應(yīng)30h產(chǎn)率最高為63.2%，純度達(dá)到92.3%。
　　 生菜葉片衰老過(guò)程中，PSK活性中心在一定程度上能降低細(xì)胞內(nèi)H2O2含量，抑制CAT保護(hù)酶活性的降低；減緩離體葉片中葉綠素和蛋白質(zhì)的降解速率，降低MDA的生成量，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)被