各種離子和生物蛋白在大管電泳中分離技術(shù)的研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳技術(shù)具有高效、快速、樣品用量少、操作模式多樣化、易于與質(zhì)譜技術(shù)相連等特點(diǎn)和優(yōu)勢,已在分析化學(xué)、生物技術(shù)、制藥和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用,尤其在生物大分子的分離分析領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。
　　 由于焦耳熱問題的存在,目前常用50μm或75μm的小內(nèi)徑毛細(xì)管作分離通道,細(xì)內(nèi)徑分離通道的采用,使得載樣量比較少,同時(shí)檢測靈敏度相對(duì)比較低,對(duì)于低含量目標(biāo)組分的檢測具有一定的挑戰(zhàn)性,對(duì)其進(jìn)一步分析存在一定的限制,所以如何從根本上解決

2、載樣量低的問題成為拓寬毛細(xì)管電泳技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域的技術(shù)瓶頸。
　　 本論文在前期基礎(chǔ)上,構(gòu)建了一套大管電泳系統(tǒng),采用內(nèi)徑為1000μm的石英管為分離通道,大內(nèi)徑石英管的采用,使得載樣量大大增加,同時(shí)檢測靈敏度也相應(yīng)得到提高,系統(tǒng)中引入了內(nèi)制冷機(jī)制,及時(shí)、有效地解決了焦耳熱的問題。
　　 本實(shí)驗(yàn)中首先采用區(qū)帶電泳模式對(duì)大管系統(tǒng)的分離性能做了一系列的評(píng)價(jià),通過對(duì)緩沖溶液pH值、濃度、內(nèi)制冷水流速和溫度、添加劑濃度、分離電壓的選擇

3、和優(yōu)化,成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)六種有機(jī)酸、三種有機(jī)堿和生物大分子的分離,并且在優(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)條件下考察了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性,取得了滿意的結(jié)果。隨后將大管區(qū)帶電泳應(yīng)用于實(shí)際樣品的分析中,測定了醬油中防腐劑的含量。
　　 毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦技術(shù)在蛋白質(zhì)分析中發(fā)揮著重要的作用,實(shí)驗(yàn)中將毛細(xì)管等電聚焦模式轉(zhuǎn)移至大管系統(tǒng)中,為了得到較好的分離結(jié)果,首先對(duì)一系列的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化,包括最佳檢測波長的確定、分離電壓、進(jìn)樣體積,冷卻液的溫度和流速、兩性電解質(zhì)的