新型毛細(xì)管電泳方法在藥物分析和蛋白質(zhì)分離中的應(yīng)用.pdf

1、毛細(xì)管電泳(CE)是一種具有高效、快速、進(jìn)樣少、成本低、污染少、自動(dòng)化高、分析對(duì)象廣等優(yōu)點(diǎn)的分析檢測(cè)方法，廣泛地應(yīng)用在藥物、蛋白質(zhì)分析等領(lǐng)域，已成為現(xiàn)代生命科學(xué)的一種非常重要的分離分析技術(shù)。在本文的工作中，我們著眼于解決毛細(xì)管電泳技術(shù)上所面臨的一些問(wèn)題，如靈敏度不夠高，分析物在毛細(xì)管壁的非特異性吸附等問(wèn)題。我們使用在線富集技術(shù)來(lái)提高毛細(xì)管電泳在藥物分析中的靈敏度，使用表面活性劑涂層方法來(lái)抑制蛋白質(zhì)在毛細(xì)管管壁的吸附，改善其分離效果。圍繞

2、這些目標(biāo)本文主要開(kāi)展以下幾方面的工作： (1)利用毛細(xì)管電泳-大體積進(jìn)樣(CE-LVSS)的方法完成對(duì)抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)及其前藥替加氟(TF)的在線檢測(cè)。最佳的電泳緩沖液為pH8.0的30mM磷酸鹽溶液。不使用大體積進(jìn)樣時(shí)，5-FU和TF的檢測(cè)限(LOD)分別是600.5ng/mL，771.4ng/mL；采用大體積進(jìn)樣后，其靈敏度提高約兩個(gè)數(shù)量級(jí)(5-FU和TF的檢測(cè)限分別降低到7.9ng/mL，6.5ng/mL

3、)；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差％RSD小于5％。與其他報(bào)道過(guò)的分析5-FU和TF的分析方法相比，該法具有明顯的優(yōu)越性(高靈敏度，高選擇性，分析時(shí)間短)，并成功應(yīng)用于抗腫瘤藥物的商用注射液的定量分析。結(jié)果證明毛細(xì)管電泳-大體積進(jìn)樣是一種簡(jiǎn)單、快捷、高選擇和高靈敏的方法。 (2)表面活性劑半永久涂層能有效防止蛋白質(zhì)在毛細(xì)管的管壁吸附。但是，由于緩沖液的沖洗致使表面活性劑在管壁脫落，是半永久涂層所面臨的問(wèn)題。本文提出一種簡(jiǎn)單通用的方法來(lái)改善表面活性

4、劑半永久涂層的穩(wěn)定性，該方法是在涂層里添加帶相反電荷的表面活性劑。選用雙十二烷基二甲基溴化銨(DDAB)和一種雙子表面活性劑，18-6-18作為半永久涂層，十二烷基硫酸鈉(SDS)作它們的對(duì)電荷表面活性劑。SDS可以改變陽(yáng)離子表面活性劑的堆積參數(shù)P，并從而調(diào)整涂層的穩(wěn)定性。加大SDS在涂層里濃度，涂層的穩(wěn)定性先增大后減小。在最佳的SDS濃度下，可以得到非常穩(wěn)定的涂層，在138kPa高壓沖洗60min，電滲流(EOF)僅改變3.6％。這種

5、SDS增強(qiáng)的涂層在分離蛋白質(zhì)時(shí)表現(xiàn)出很好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性(日內(nèi)遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)＜1.1％，n=9)。再者，被測(cè)蛋白質(zhì)的高分離效果和回收率證明這種涂層具有很強(qiáng)的抑制管壁吸附的能力。最后，我們發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離效率，比傳統(tǒng)的EOF值，更能準(zhǔn)確的指示涂層的穩(wěn)定性。 (3)提出了一種CE同時(shí)分離酸堿性蛋白質(zhì)的簡(jiǎn)單方法。該方法利用陽(yáng)離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)來(lái)構(gòu)建巨型膠束網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)作為偽固定相來(lái)同時(shí)分離十種