過氧化氫等活性氧的熒光素衍生物探針研究.pdf

1、合理設(shè)計(jì)熒光素的衍生物分子，對(duì)于提高分析檢測(cè)的靈敏度和選擇性具有重要的意義。本文在查閱大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上參考前人工作，結(jié)合熒光素分子的特殊結(jié)構(gòu)，制備了多種熒光素衍生物，將之用于活性氧的檢測(cè)，并且在此基礎(chǔ)上初步構(gòu)建了基于葡萄糖氧化酶（GOD）催化體系的免疫分析。具體內(nèi)容包括以下方面： 第一部分：利用Suzuki催化偶聯(lián)反應(yīng)的原理，設(shè)計(jì)了新的3′,6′-對(duì)戊酰硼熒光素探針的合成路線。本實(shí)驗(yàn)研究了反應(yīng)時(shí)間、溶劑、堿性強(qiáng)度、催化劑等因素對(duì)

2、反應(yīng)產(chǎn)率的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該合成路線具有成本低廉，產(chǎn)率相對(duì)較高的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)還檢測(cè)了探針對(duì)H2O2的熒光響應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該探針具有靈敏度高，檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，在2.3×10-12 - 2.0×10-8 mol/L H2O2 溶液范圍內(nèi)，探針的熒光發(fā)射呈逐漸增強(qiáng)趨勢(shì)，檢測(cè)下限為2.3×10-12 mol/L。其非氧化熒光增強(qiáng)機(jī)理有助于在生物體系的H2O2 檢測(cè)中避免其他氧化性物質(zhì)的干擾。 第二部分：本實(shí)驗(yàn)初步發(fā)展了基于GOD催

3、化體系的新型熒光免疫方法用于檢測(cè)癌癥標(biāo)志物胸苷激酶（TK）。采用競(jìng)爭(zhēng)免疫分析方法，將標(biāo)記了生物素的TK與固定在醋酸纖維膜上的TK 抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)，通過生物素和親和素的特異性結(jié)合將生物素標(biāo)記的GOD 固定在抗原上進(jìn)行免疫放大，以3′,6′-對(duì)戊酰硼熒光素為熒光底物，通過檢測(cè)GOD和葡萄糖作用產(chǎn)生的H2O2實(shí)現(xiàn)了TK 的快速測(cè)定。 結(jié)果表明，在抗體固定量為200 ng/mL時(shí)，生物素標(biāo)記的TK在競(jìng)爭(zhēng)免疫方法下檢測(cè)濃度可以達(dá)到0.5

4、 ng/mL，我們認(rèn)為該方法對(duì)TK的檢測(cè)簡(jiǎn)單易行，在短時(shí)間內(nèi)有較好的熒光響應(yīng)，靈敏度較高，有望能發(fā)展出基于GOD催化體系的TK免疫檢測(cè)方法。 第三部分：合成出了一系列的熒光素酯化衍生物：熒光素對(duì)苯磺酸酯、熒光素對(duì)苯甲酸酯、熒光素對(duì)苯磷酸酯、呫噸酮對(duì)磷酸酯，考察了這四種物質(zhì)在H2O2、O2<'- >和HO等活性氧物質(zhì)下的熒光響應(yīng)特性，并對(duì)熒光素衍生物的響應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了探討。熒光素對(duì)苯磺酸酯在H2O2、O2<'->和SOD 以及O2<