復(fù)合配基親和色譜填料的制備.pdf

1、親和色譜是一種高效簡便的蛋白純化分離技術(shù)，高效親和色譜(HPAC)是在經(jīng)典親和色譜技術(shù)上結(jié)合高效液相色譜(HPLC)的特點發(fā)展起來的新技術(shù)，它具有分離速度快、分離效果好、回收率高和操作簡單等優(yōu)點，適用于批量樣品的分析和制備。8微米左右的表面多孔單分散交聯(lián)聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯/甲基丙烯酸乙二醇酯P(GMA-EDMA)微球可作為高效液相色譜柱填料中的基質(zhì)材料。本文將P(GMA-EDMA)微球作為高效液相色譜的基質(zhì)材料，三嗪染料和金屬作為親和

2、配基，制備一種新型的復(fù)合配基親和色譜填料并將其用于對蛋白質(zhì)的分離純化，主要做了以下研究工作： 1．以分散聚合法制備的2微米聚苯乙烯微球為種子，GMA、EDMA為單體，用一步種子溶脹法制備了表面多孔的P(GMA-EDMA)微球。該微球7微米左右，粒徑單分散，表面多孔，剛性好，適合用做高效色譜柱填料。 2．以自制P(GMA-EDMA)微球為基球，通過不同的連接方式，將染料配基PBMx-R和金屬Ni<'2+>固定在基球上，制備

3、成兩種復(fù)合配基高效親和色譜填料Ni<'2+>-IDA-PB-P(GMA-EDMA)和Ni<'2+>-PB-P(GMA-EDMA)。 3．用勻漿法將所制的復(fù)合配基親和色譜填料填裝成高效親和色譜柱，通過比較復(fù)合配基親和色譜與單一親和配基親和色譜對蛋白質(zhì)的保留行為和吸附情況，探究復(fù)合配基親和色譜對蛋白質(zhì)的保留機理，將含有染料配基和金屬配基的Ni<'2+>-IDA-PB-P(GMA-EDMA)、Ni<'2+>-PB-P(GMA-EDMA

4、)復(fù)合配基親和色譜柱與含有單一配基的親和色譜柱對蛋白質(zhì)的吸附情況進行比較，選擇最佳色譜柱。 4．在10×0.46 cm的Ni<'2+>-IDA-PB-P(GMA-EDMA)色譜柱上，探討了pH、流速和固定了不同金屬離子的色譜柱對溶菌酶分離的影響，得出溶菌酶的最佳淋洗條件為：流動相A為0.02 mol/L pH6.86磷酸鹽緩沖液，B為含1.0 mol/L NaCl的pH6.86磷酸鹽緩沖液，淋洗梯度為15_minB從0到100％