LC-MS-MS在環(huán)境水體與實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)藻株毒素監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、目的：傳統(tǒng)的微囊藻毒素（microcystins,MCs）和節(jié)球藻毒素（nodularins,NOD）檢測(cè)方法存在定量或定性不夠準(zhǔn)確的問題，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）可根據(jù)藻毒素相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息進(jìn)行準(zhǔn)確定性、定量分析，大大提高靈敏度和精確度。本文應(yīng)用LC-MS/MS檢測(cè)方法，從兩方面開展研究：一是2015年對(duì)無錫市太湖、長江多個(gè)自來水廠原水及出廠水中4種藻毒素（MC-LR、MC-RR、MC-YR、NOD）的污染狀況進(jìn)行了

2、研究，為環(huán)境評(píng)價(jià)及人群暴露風(fēng)險(xiǎn)提供必要科學(xué)依據(jù)；二是對(duì)野外分離培養(yǎng)的兩株微囊藻在不同光照條件下各生長階段產(chǎn)毒情況進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，以探索光照對(duì)水華形成及產(chǎn)毒作用的影響。
　　方法：選擇MC-LR、MC-RR、MC-YR、NOD為研究對(duì)象，優(yōu)化液相色譜條件、質(zhì)譜條件、固相萃?。⊿PE）前處理?xiàng)l件，然后對(duì)確定的SPE-LC-MS/MS方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線、方法檢出限與定量限、準(zhǔn)確度和精密度，檢驗(yàn)該方法的可靠性與適用性。201

3、5年6~9月期間對(duì)無錫市太湖、長江自來水原水和出廠水6個(gè)采樣點(diǎn)進(jìn)行采樣，水樣經(jīng)上述優(yōu)化確定的SPE-LC-MS/MS方法流程處理、檢測(cè)MC-LR、MC-RR、MC-YR、NOD的含量。在不同光照強(qiáng)度下培養(yǎng)兩株產(chǎn)毒微囊藻，在不同生長期通過細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定藻細(xì)胞密度，藻細(xì)胞經(jīng)反復(fù)凍融破碎超純水提取藻毒素后LC-MS/MS檢測(cè)MCs產(chǎn)量。
　　結(jié)果：1.樣品經(jīng)HLB柱固相萃取富集純化后，液相色譜以Waters Atlantis C18（2.

4、1mm×150mm,3.5μm）色譜柱為分離柱，以乙腈和含0.1％甲酸水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）在電噴霧（ES I）正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）下，選擇質(zhì)荷比（m/z）995.3-135.1/213.1、519.8-135.1/127.1、1046-135.1/213.3、825.6-135.3/227分別為MC-LR、MC-RR、MC-YR、NOD的定量離子對(duì)/定性離子對(duì)，在15min內(nèi)完成對(duì)4種肝臟毒素定性定量

5、分析；方法的線性相關(guān)系數(shù)0.992~0.998，檢出限0.0042μg/L~0.0088μg/L，定量限0.0140μg/L~0.0292μg/L，高中低濃度加標(biāo)回收率90.33%~107.11%，日內(nèi)精密度2.40~14.27，日間精密度2.77~14.12。2.2015年6~9月期間太湖、長江自來水原水中藻毒素以 MC-LR、MC-RR為主，均未檢出NOD；太湖水中8月份MC-LR最高濃度達(dá)到1.9099μg/L，超過我國《生活飲用

6、水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的1.0μg/L標(biāo)準(zhǔn)，MC-RR、MC-YR最高濃度分別為0.4472μg/L、0.3447μg/L；長江自來水原水6月和9月未檢出4種肝臟毒性藻毒素，7月和8月僅檢出低濃度MC-LR、MC-RR，最高濃度分別僅為0.0496μg/L、0.0406μg/L；6~9月期間，所有出廠水中均未檢出4種肝臟毒性藻毒素。3.在2500 lx條件下，DH2藻株生長最快，可達(dá)到最大生物量2.6×107個(gè)/mL；相較其他光照條件，不同

7、生長期DH2藻株的胞內(nèi)產(chǎn)毒量在1000lx條件下均最大，最高可達(dá)110 fg/ce ll；在2500 lx和4000 lx條件下，LH1藻株生長前期的生長速度相近，后期4000lx可達(dá)到最大生物量1.97×107個(gè)/mL；光照對(duì)LH1藻株胞內(nèi)產(chǎn)毒量的影響在不同生長期間并不一致；DH2、LH1藻株在對(duì)數(shù)生長前期胞內(nèi)產(chǎn)毒量最高，之后產(chǎn)毒量降低。
　　結(jié)論：1.本研究確定的SPE-LC-MS/MS檢測(cè)方法能夠定性定量檢測(cè)MC-LR、MC