AMPK在肌源性IL-6抑制胰島素抵抗發(fā)生的作用研究.pdf

1、本論文研究AMPK信號通路在肌源性IL-6抑制胰島素抵抗發(fā)生的作用;探討血液、肌肉、肝臟和脂肪等組織在運動，高脂膳食和shRNA(short hairpin RNA)干預下，研究AMPK各組織表達量與肌源性IL-6的相互影響和變化情況;以及運動與肌源性IL-6的關系;探討AMPK改善大鼠胰島素抵抗的機制;揭示AMPK是肌源性IL-6抑制胰島素抵抗發(fā)生的重要轉導因子之一。
　　目的:有氧耐力訓練的干預下的高糖高脂膳食大鼠實驗，研究肌

2、源性IL-6對胰島素抵抗的作用，探討腺苷酸活化蛋白激酶(activated protein kinases，AMPK)作為蛋白通路抑制胰島素抵抗的作用研究。
　　方法與步驟:雄性SD大鼠72只，約4周齡，體重100±10g，按體重隨機分成9組(A-I)，每組8只。A組:安靜正常飼料組;B組:安靜高脂飼料組;C組:運動高脂飼料組;D組:運動高脂飼料shRNA組;E組:運動高脂飼料空白載體組;F組:安靜高脂飼料shRNA組;G組:安靜

3、高脂飼料空白載體組;H組:安靜正常飼料shRNA組;I組:安靜正常飼料空白載體組。運動組需進行動物跑臺有氧訓練，每個星期休息一天，運動訓練6天，起始跑速為16米/分，時間為50分鐘，訓練期為8周;需要注射的SD大鼠同時采用尾部靜脈注射shRNA或空白載體進行對比，shRNA或空白載體實驗鼠在正式開始訓練前一天尾部靜脈注射，后三次每運動2周后休息日注射shRNA或空白載體;有氧訓練每完成一周運動，跑速增加1米/分鐘，時間延長5分鐘;至第8

4、周結束時，運動速度為23米/分鐘，時間為85分鐘。實驗結束，所有SD大鼠采用麻醉法取樣。分別提取大鼠的血液、肌肉組織，脂肪（腹脂）和部分肝進行超低溫保存再分析數(shù)據(jù)。然后對比不同組中，空腹血糖，空腹胰島素和葡萄糖輸注率變化情況，在注射shRNA或空白載體的對比情況下，比較基因沉默組和空白組的組織中大鼠血清IL-6濃度、各組織IL-6mRNA水平。分析檢測數(shù)據(jù)來研究IL-6與AMPK抑制胰島素抵抗形成的作用。
　　實驗測試的指標:

5、r>　　1:空腹血糖，空腹胰島素和葡萄糖輸注率在各組中的表達量。
　　2:大鼠血清IL-6濃度、各組織IL-6mRNA水平。
　　3:IL-6在肌肉、肝和脂肪組織的表達對照量。
　　4:AMPK在肌肉、肝和脂肪組織對比表達量。
　　結論:
　　(1)高脂飲食能誘導大鼠發(fā)生胰島素抵抗，高脂飲食形成胰島素抵抗的大鼠其肝臟與脂肪組織的AMPK顯著激活。
　　(2)安靜和高脂飲食形成胰島素抵抗狀態(tài)下，肝臟和脂

6、肪組織中IL-6基因表達最強;而運動應激則大幅度提高了骨骼肌IL-6的基因表達。
　　(3)大鼠通過運動可以改善和預防胰島素抵抗發(fā)生，運動抑制胰島素抵抗發(fā)生在一定程度上是通過IL-6而起作用。
　　(4)運動會激活AMPK蛋白表達增加，在抑制胰島素抵抗形成的過程中，與AMPK有關。
　　(5)shRNA干預效果明顯，能達到預期設計的實驗要求，在實驗過程中，IL-6能有效控制AMPK蛋白表達量，但IL-6基因的沉默卻不一