黃芩苷鍵合硅膠色譜固定相的制備、表征及應(yīng)用.pdf

1、中草藥有效成分含天然獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，用作色譜分離材料具有作用位點(diǎn)豐富、色譜藥物雙功能等特點(diǎn)，在天然藥物分析、手性分離領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用前景。新型中草藥有效成分鍵合色譜分離材料的研究和開(kāi)發(fā)對(duì)中藥現(xiàn)代化具有重要意義，為深層次利用我國(guó)中草藥藥用成分開(kāi)辟了新途徑，它是色譜學(xué)與相關(guān)應(yīng)用科學(xué)交叉的前沿研究課題，顯示出重要的學(xué)術(shù)價(jià)值。此外，該分離材料在中藥活性成分富集純化中同樣有較高的應(yīng)用價(jià)值。本學(xué)位論文制備了一種黃芩苷鍵合硅膠固定相，表征和評(píng)價(jià)了新固定

2、相的高效液相色譜性能，較系統(tǒng)地探討了相關(guān)色譜保留機(jī)理，并將該鍵合硅膠作為新型分離材料用于黃酮類化合物的分離富集。主要研究?jī)?nèi)容如下： 1．對(duì)近年來(lái)高效液相色譜鍵合硅膠固定相和中草藥有效成分的提取純化方法進(jìn)行了綜述，分析總結(jié)了固定相制備表征、分類及各種固定相的應(yīng)用、中草藥活性成分的傳統(tǒng)分離提取方法和現(xiàn)代分離提取技術(shù)，展望了植物活性成分在色譜分析和中藥有效成分提純中的應(yīng)用前景，并以此作為本論文的選題依據(jù)和研究工作的出發(fā)點(diǎn)。 2

3、．采用固液相表面連續(xù)反應(yīng)法，以γ-氨丙基三乙氧基硅烷(TM550)為偶聯(lián)劑，制備了一種新型天然中草藥藥用成分鍵合固定相——黃芩苷鍵合硅膠固定相(BBSP)。首先制備含氨基的偶聯(lián)劑硅膠，然后將黃芩苷酰氯化，最后通過(guò)酰胺間隔臂將黃芩苷鍵合到硅膠表面。新固定相的外部裹土了黃酮苷元疏水層，增加了鍵合層的化學(xué)穩(wěn)定性。采用紅外光譜、質(zhì)譜分析、元素分析、熱重分析和化學(xué)分析等手段表征了新固定相的結(jié)構(gòu)，并對(duì)鍵合反應(yīng)的制備路線和反應(yīng)條件進(jìn)行了一定的優(yōu)化。結(jié)

4、果表明，黃芩苷配體已成功鍵合到硅膠基質(zhì)上，測(cè)定BBSP表面黃芩苷的鍵合量為0.11 mmol/g，比商品ODS鍵合量低，顯然配體的位置效應(yīng)有較大的影響。不同批次鍵合相的鍵合量相近，說(shuō)明該鍵合反應(yīng)路線簡(jiǎn)便易行。 3．采用勻漿法恒壓填裝色譜柱，首先測(cè)定柱效和對(duì)酸性流動(dòng)相的穩(wěn)定性，然后以苯同系物探針及借鑒Kimata等提出的簡(jiǎn)便方法評(píng)價(jià)黃芩苷鍵合相(BBSP)的基本色譜性能，包括疏水性能、氫鍵能力、立體選擇性和離子交換能力等。然后以多

5、環(huán)芳烴、含氮化合物、位置異構(gòu)體、酚類化合物、核苷和堿基、黃酮等化合物為溶質(zhì)探針，并與傳統(tǒng)的ODS對(duì)照研究，進(jìn)一步評(píng)價(jià)新固定相對(duì)酸性、堿性和中性化合物等不同類型溶質(zhì)的分離能力，分離對(duì)象涵蓋不同結(jié)構(gòu)、不同極性和不同電離性質(zhì)的探針，它們的色譜行為能較系統(tǒng)地揭示新固定相的色譜分離機(jī)理，為新固定相的實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。結(jié)果表明，該固定相具有類似ODS的良好反相色譜性能，除疏水作用外，還能為溶質(zhì)提供較強(qiáng)的氫鍵、偶極、π-π共軛、n-π超共軛、離子

6、交換等多種作用位點(diǎn)，在電荷轉(zhuǎn)移中起電子受體作用。與ODS相比，由于包埋了極性的酰胺官能團(tuán)，屬于靜電屏蔽固定相，而且內(nèi)層為親水的葡萄糖基，因此對(duì)堿性物質(zhì)有較好的分離。此外，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)新固定相對(duì)黃酮類化合物有強(qiáng)的選擇性保留，預(yù)示其在分離富集黃酮類化合物中有應(yīng)用價(jià)值。 4．將黃芩苷鍵合到常用的無(wú)定形硅膠載體上，制備黃芩苷鍵合硅膠分離富集材料(BBS)，用于中藥有效成分的富集和提取。通過(guò)紅外、元素分析、熱重分析和化學(xué)檢識(shí)的方法對(duì)BBS進(jìn)行

7、了結(jié)構(gòu)表征和鍵合量的測(cè)定?？疾炝遂o態(tài)下BBS在溶液中對(duì)黃芩苷的吸附作用，表明硅膠表面的配體與溶液中的溶質(zhì)間存在相似相溶作用，這為從中草藥復(fù)雜體系快速富集有效成分提供了新途徑。為了研究BBS的分離富集性能，本文首先考察該材料對(duì)黃芩苷本身的富集作用，考察了不同實(shí)驗(yàn)條件對(duì)富集效果的影響，初步探索了黃芩苷的吸附和解吸條件。實(shí)驗(yàn)證明，雖然BBS鍵合量較低，但該材料對(duì)黃芩苷有明顯的吸附作用，吸附容量可達(dá)到214．26mg/g。 5．將黃芩苷

8、鍵合硅膠(BBS)作為分離富集材料，用于對(duì)黃芩中總黃酮的富集純化。采用HPLC-DAD-ESI-MS初步研究了黃芩提取液的主要成分，以顯色可見(jiàn)分光光度法為手段，研究了BBS對(duì)黃芩總黃酮的純化作用，考察了影響因素，并進(jìn)行了靜態(tài)吸附一解吸和動(dòng)態(tài)吸附．解吸實(shí)驗(yàn)；以HPLC為作為輔助手段，獲取吸附前后各組分濃度變化的詳細(xì)信息。結(jié)果表明，BBS對(duì)黃芩提取液中的黃酮類化合物具有較好的選擇性作用，在所用實(shí)驗(yàn)條件下靜態(tài)飽和吸附量為81.96mg/g，對(duì)