仿細(xì)胞膜色譜固定相的制備及其應(yīng)用.pdf

1、生物色譜技術(shù)是對中藥活性成分篩選，分離和結(jié)構(gòu)鑒定同時進(jìn)行的新技術(shù)。通過對已有生物色譜模型優(yōu)缺點(diǎn)的分析，本論文提出在固定相表面，構(gòu)建一層類細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)以制得仿細(xì)胞膜色譜固定相，建立一種快速高通量篩選藥物新模型-仿細(xì)胞膜色譜法，以寧夏民族地道藥材-苦豆子為例，闡明仿細(xì)胞膜色譜法在中藥活性成分篩選中的應(yīng)用。主要研究工作如下：
　　 1.以三氯氧磷、氯化膽堿和甲基丙烯酸-2-羥乙酯(HEMA)為原料，合成了含磷酰膽堿基團(tuán)的2-甲基丙烯酰氧

2、乙基磷酰膽堿(MPC)，再將MPC嫁接聚合到活化硅膠表面，制得磷酰膽堿色譜固定相；將磷酰膽堿色譜柱作為兩性離子交換色譜柱同時分離了2種酸性和2種堿性標(biāo)準(zhǔn)蛋白；研究了四類不同結(jié)構(gòu)約物在磷酰膽堿色譜柱上的保留特性(lgkpcc)，同時與磷脂膜色譜(immobilized artificial membrane chromatography，IAMC)柱、正辛醇/水系統(tǒng)進(jìn)行了比
　　 較，結(jié)果表明，lgkpcc與lgkIAM、lgDO

3、/B.7.4分別具有明顯的相關(guān)性，說明用磷酰膽堿層模擬細(xì)胞膜磷脂層與藥物的相互作剛是合理的。
　　 2.剛柱層析法從大豆磷脂中純化出腦磷脂，將腦磷脂固定于醛基改性后的硅膠上并自組裝成雙層膜，得到腦磷脂雙層膜色譜固定相，用于預(yù)測四類不同化學(xué)結(jié)構(gòu)藥物的膜滲透性。
　　 3.用離心法得到支氣管細(xì)胞膜，并將它吸附于酸活化后的硅膠表面，制得支氣管細(xì)胞膜色譜固定相。測定了已知受體藥物在支氣管細(xì)胞膜色譜柱上的保留特性，結(jié)果表明，已知受

4、體藥物中，β2-腎上腺素受體激動劑與阻斷劑有保留行為，但拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，無法用于苦豆子活性成分的篩選。
　　 4.用親和層析法純化得β2-腎上腺素受體，并將其固定于含環(huán)氧基團(tuán)的磷酰膽堿色譜固定相上，制得仿細(xì)胞膜色譜固定相。剛前沿色譜法測定了硫酸沙丁胺醇、重酒石酸去甲腎上腺素和鹽酸普萘洛爾與β2-AR的結(jié)合常數(shù)。結(jié)果表明，仿細(xì)胞膜色譜固定相上的β2-AR與藥物的結(jié)合常數(shù)順序與文獻(xiàn)報(bào)道一致，說明β2-AR經(jīng)過純化，固定化，裝柱等操作后