微囊藻毒素合成酶基因PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、　　微囊藻水華在世界范圍內(nèi)頻繁發(fā)生,可產(chǎn)生損害人類健康的微囊藻毒素,是淡水水體中危害性最大的水華之一。微囊藻毒素主要由微囊藻產(chǎn)生,是一種細(xì)胞內(nèi)毒素,具有強(qiáng)的促癌作用,長(zhǎng)期飲用含微囊藻毒素的水能造成人和動(dòng)物的中毒及肝損傷。常用的HPLC、ELISA等方法能檢測(cè)存在于水體中的微囊藻毒素,但無法在毒素從藻細(xì)胞內(nèi)釋放之前,對(duì)微囊藻的產(chǎn)毒能力進(jìn)行判斷。
　　本文針對(duì)微囊藻毒素合成酶基因——mcyB,設(shè)計(jì)、篩選特異性引物,建立了適用于微囊藻毒

2、素基因檢測(cè)的全細(xì)胞PCR方法。該方法不受藻細(xì)胞的生長(zhǎng)時(shí)期影響,也不受其它藻類細(xì)胞或雜菌的干擾。靈敏度測(cè)試結(jié)果表明,取10 μL藻細(xì)胞樣品為模板,在50 μL反應(yīng)體系中,一步PCR檢測(cè)下限為100-1000cells/反應(yīng),二步PCR(即套式PCR)檢測(cè)下限為1-10 cells/反應(yīng)。套式PCR檢測(cè)方法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定性好的特點(diǎn),可用于低藻濃度水樣的微囊藻毒素基因檢測(cè)。
　　以上述方法對(duì)從廣東省11個(gè)供水水庫中分離的3

3、0株微囊藻進(jìn)行毒素基因檢測(cè)。這11個(gè)水庫分別是鶴地水庫、湯溪水庫、流溪河水庫、大鏡山水庫、沙田水庫、高州水庫、契爺石水庫、飛來峽水庫、深圳水庫、新豐江水庫和赤石逕水庫；30株微囊藻分屬于水華微囊藻、銅綠微囊藻和具緣微囊藻。共檢測(cè)出微囊藻毒素基因陽性藻株12株,陽性率為40%,其中8株為水華微囊藻。陽性藻株分別來自鶴地水庫、湯溪水庫、流溪河水庫、大鏡山水庫、高州水庫、飛來峽水庫和深圳水庫等7個(gè)水庫。
　　對(duì)廣東省12個(gè)供水水庫的水樣

4、進(jìn)行微囊藻毒素基因PCR檢測(cè)。12個(gè)水庫包括前述11個(gè)水庫以及大沙河水庫,共136個(gè)水樣,采集時(shí)間從2003年6月至2004年4月。檢測(cè)發(fā)現(xiàn),水樣經(jīng)一步PCR擴(kuò)增,檢出陽性樣品15個(gè),陽性率為11.1%；二步PCR檢出陽性樣品59個(gè),陽性率為43.4%。除深圳水庫外的11個(gè)被檢水庫均出現(xiàn)陽性樣品。其中湯溪水庫、高州水庫、大鏡山水庫和沙田水庫套式PCR檢測(cè)陽性率分別為95.2%、66.7%、66.7%和60.0%,表明具產(chǎn)毒潛力的微囊藻在